[35S]GTPγS結合試験とは，どんな実験なのでしょうか？

質問

[35S]GTPγS結合試験とは，どんな実験なのでしょうか？

[35S]GTPγS結合試験とは，どんな実験なのでしょうか？（できれば，大学1年くらいに分かる程度で，ご説明いただけると幸いです．また上記の実験に類似するような実験もありましたら，ご説明していただけると助かります．）よろしくお願いいたします．

回答No.1

stringf35 · ベストアンサー

GTP結合蛋白質へのGTP結合活性を定量する実験です。
ただのGTPを使っても検出する手段がないので、
35Sで標識されたGTPを用いるのが一般的です。

GTPではなくGTPγSを使う理由ですが、GTP結合蛋白質は、
GTPを加水分解する性質を持っているものが多いので、
γ位がチオリン酸になっていて加水分解されない
GTPγSを用いるのが一般的です。

実験の手順としては、
精製したGTP結合蛋白質と[35S]GTPγSを混和し、
しばらくインキュベートして結合させます。
その後、結合しなかったGTPγSを除く必要があるのですが、
これには蛋白質を吸着する性質のあるニトロセルロース膜を
使います。

膜上に吸着された蛋白質にはGTPγSが結合していますから、
その膜の放射能を液体シンチレーションカウンターという
機械で測定すれば、どのくらいのGTPγSが結合しているかが
定量できます。

類似の実験としては、蛍光標識されたGTPを使う例も
増えています。

説明が難しければまた質問してください。

お礼

ご丁寧な解説ありがとうございました。