細胞のコンタミの原因について質問です。

質問

現在、接着細胞の培養を行っているのですが、誤って培養液に対する細胞溶液の量をいつもよりも4倍入れて継代をしてしまいました。一日目は大丈夫だったのですが、二日目にコンタミをおこしていました。
これはやはり、細胞が増えすぎたからでしょうか。お答えいただけると助かります。

回答No.5

noname#160718 · ベストアンサー

No.2のJagar39です。

　フラスコで培養していたんですね。とすると、No.4さんが指摘されたインキュベーター内でのコンタミの可能性は消して良いでしょう。シャーレやプレートで培養する時はたまにあることですが・・・

　「たまたま」のコンタミであれば今後それほど心配することはないと思いますが、メディウムやトリプシンなどがコンタミしていないかは一度確認した方が良いと思います。

　過増殖で細胞が死んだりした時、メディウム中に細胞が高濃度に浮遊するため、「コンタミ」と間違える時があります。
　また、メディウムは普通冷蔵庫でストックしていると思いますが、冷蔵状態だと作製時にコンタミしていても増えてくるのにたいへん時間がかかるため、すぐには原因がわからないことがあります。
　なので私は、だいたい一度に３Ｌのメディウムを作っていたのですが、200mlほど小フラスコに入れてインキュベーターの中に入れっぱなしにしていました。そうしておくと、コンタミしていた時には比較的早期に判るので。

お礼

ありがとうございます。ご指摘されたとおり行ったところ、ミディアム、トリプシン、PBSには問題がありませんでした。おそらく、細胞の高濃度浮遊と間違えたと私も思います。見た人は細胞濃度が濃く入っていることを知らないので。
とにかく、現在は問題なく細胞培養が行えております。色々とアドバイスをしていただきまして、ありがとうございました。また、困ったことが起きましたら連絡したいと思います。

回答No.4

MIYD

コンタミの原因は、特定のボトルが汚染している等が分からない限り、1つの原因に絞り込むのは不可能です。

コンタミが雑菌等の混入であることはNo.2さんの説明で分かっているのでしょうか？
コンタミの原因に細胞の増えすぎや操作時間が書かれているので、同じ「コンタミ」について話しているのか不安になります。

安全キャビネット(またはクリーンベンチ)内で適切に扱っていれば、1時間程度操作に時間がかかってもコンタミはしないと思います。
(細胞の生きは悪くなるでしょうけど)
コンタミするのは、時間ではなくコンタミの原因となる生物をどこかから混入させたからです。

過増殖で死んだのであれば、撒き数を気にすれば次回から起こらなくなるでしょうが、
コンタミであれば、操作か設備に問題がありますので、それらを見直す必要があります。

インキュベーターのファン付近にコンタミの原因が発生していて、ファンによって撒き散らかされてコンタミすることはありますので、一概にご自分の操作ミスと考えるのはどうかと思います。

お礼

さすがにコンタミの意味は分かっています（笑）
ただ、密集培養や継代操作時間にてまどったりすると、雑菌の混入もあるのかとちょっと思っただけです。今日、培養液のボトルがコンタミしていなかったので、操作時間とかは関係ないみたいです。
おそらく、ボスが細胞が入ったフラスコをインキュベーター外に放置しすぎたせいかもしれないです。とりあえず、また今日培養したので二三日様子を見てまたコンタミしていたらそのときに何か考えたいと思います。ありがとうございました。

回答No.3

MIYD

どのような状態か分からない状態について、その原因が予想とあっているかを質問しているのですか？

過剰増殖で死ぬ場合はあります。
ただ、確認した人がまともな知識を持っているのであれば、
過剰増殖による細胞死をコンタミとは呼びません。
そのような報告を受けた場合、バクテリアや酵母などが増えていたと考えるのが自然です。

お礼

そうですか・・久しぶりにコンタミしたので原因がよく分からなかったのですが、自分の操作ミスしか考えられないですね。操作に時間がかかったこともコンタミの原因になるのでしょうか？

回答No.2

noname#160718

コンタミとは「汚染」という意味です。
　なので本当にコンタミが起きていたとすれば、メディウムの量などとは無関係です。操作ミスか、そもそもメディウムなり継代に使ったトリプシンなどの試薬なりが汚染されていたかのどちらかでしょう。

　まさか単に細胞がダメになった、という意味で「コンタミ」という言葉を使われたのではないとは思うのですが・・・コンタミしたんですよね？

お礼

すみません、下の方と同じ返答になってしまうのですが、詳細は分かりません。おそらく、確認した人（私は確認していません）がコンタミと言っていたのですが、ただ細胞が死んでいたのをコンタミと言ったのかもしれませんが、細胞が死んでいたのは確かなようです。
細胞が密集した状態だと細胞が死んでしまうことはあるのでしょうか。

回答No.1

MIYD

増えたのはバクテリアでしょうか？
一日目はまだ十分に増えていないため気付かなかったのだと思います。

お礼

詳細は分かりません。おそらく、確認した人（私は確認していません）がコンタミと言っていたのですが、ただ細胞が死んでいたのをコンタミと言ったのかもしれませんが、細胞が死んでいたのは確かなようです。