ウエスタンブロッティングについて

質問

ウエスタンブロッティングでは、どうして一次抗体と二次抗体の2種類の抗体を使うのかがよく分かりません。
宜しければ教えてください。

回答No.2

f_f_06 · ベストアンサー

検出感度を上げるためだと思います。

あくまで例えばですが、
“タンパク一分子に対して、抗体は二分子結合できる”
と思って聞いてください。（実際はもっと多く結合できると思いました）

二次抗体を使わずに、標識してある一次抗体のみを使用すると、
目的タンパク一分子に対して標識物質は二分子です。

一方、標識してある二次抗体を利用すると…
タンパク一分子に対して二分子の抗体（一次抗体ですね）が付き、その一次抗体それぞれに二分子の二次抗体が付きます。
つまり、最終的に目的タンパク一分子に対して標識物質は四分子です。
単純に考えれば、感度は倍になるわけです。

実験の手間や要する時間は確実に増えますが、二次抗体を使うのが一般的なように思います。
私自身はタンパクを用いた実験経験は少ないですが、必ず二次抗体を使っていました。
あるような…、ないような…、などというあいまいな結果が一番困りますからね。

回答No.1

MIYD

二次抗体が標識されていることは分かりますね。

標識するにはお金がかかります。
標識された二次抗体を使用することで、
一次抗体全てを標識する手間とコストを省くことが出来ます。