SDS-PAGE用マーカーが上手く流れていないようなのですが。。

質問

はじめまして(*´∇｀*)
　今年の四月から、生化学系の研究室に配属されたものです。
　さっそくなのですが、質問をさせていただきます。

　SDS-PAGEに使うマーカーのことなのですが、今回、SIGMAの「PRESTAINED SDS MOLECULAR WEIGHT MARKERS」MWM-105Aというものを用いました。UreaやサンプルBufferを加え、自分でマーカー溶液を作るものでした。それを何度か使ってみたのですが、どうも、ちゃんと流れていないようなのです。伸びがよくなく、縮こまった感じになっています。一応、バンドは分かれているのですが・・・。自分のタンパクの方は目的のものだと思い、その分子量から見て、マーカーがおかしいのでは・・と判断しているので、なんともいえないのですが。。
　ゲルの固さ、PAGE機器の違いにもよると思うですが、３０ｍAで５０分ほど流しても、マーカーのバンドの一番下（このマーカーでは26600？）がゲルの半分の部分ほどまでしか流れていません。
　ちゃんとした状況が説明できなくて申し訳ないのですが、もし、解決策や、その他何か考えられることがございましたら、意見をよろしくお願いしますm(__)m

回答No.1

dadachan · ベストアンサー

Ureaなどを用いる場合、粘度が高くなる場合があります。
そういった場合には、インスリンを注射するシリンジ（マイジェクター）など、注射針を何度か通してあげるとサラサラになります。
なお、マーカーも使用前に一度SDSと結合させるためにboilしてあげるといいですよ。

一番小さいマーカーが26kDaとは、かなり大き目の蛋白を検出するためのマーカーみたいですね。
それも理由の一つかもしれませんね。

お礼

お返事が大変遅くなりましたm(__)m
　とても役立つことを教えていただき、さっそく実際に実験で取り入れてみたいと思います。
　扱っているタンパクは分子量３万ほどなので、あまり適したマーカーと言えないのかな・・と思いました。
　有難うございました！