- ベストアンサー
ブルー・ホワイトコロニーセレクションについて
ollinの回答
もっと為になる回答があると思うのですが、取り敢えず思ったところを… ブルーホワイトセレクションというのは、目的の断片じゃなくても、 何かが挟まってしまえばコロニーは白色になってしまうものですよね? ということは、何かの拍子にできてしまったごく小さな、 それこそ電気泳動では判らないような小さな断片が挟まってしまって それでコロニーが白くなってしまったのではないでしょうか。 はたまた目的の挿入断片が短すぎてバンドパターンの変化が 観察されなかったとか…それはないですか… ベクターを作る時に、丁寧にやらないとDNAが混入したりして 思った結果が出ないこともありますので、参考まで。
関連するQ&A
- ブルーホワイトセレクションについてです。
ブルーホワイトセレクションについてです。 先輩が培養に成功した大腸菌とライゲーションの混合液をもらい、自分の培地にX-GALとIPTGと共にまいたらコロニーが全くでませんでした。 原因は培地か培養液をまく過程しか考えられないのですが何が原因でしょうか? アンピシリンが失活しているかどうかを確認するため、自分の唾液を培地にまいたところ細菌が培養されていなかったので、アンピシリンは効いていると思います。 X-GALとIPTGもプロトコル通りに作ったつもりなのですがほかに原因は考えられますか? どなたかご教授お願いします。
- 締切済み
- 生物学
- DNA断片のクローニング実験について
初めまして。実験レポートの課題で苦しんでいます。どなたかアドバイスをお願いいたします。 実験は、(1)組換えプラスミド(pUC119+挿入DNA断片)を宿主大腸菌DH5αMCRに導入し、抗生物質とX-Galの入ったLB寒天培地上でカラー選択する。(2)形質転換体と思われるアンピシリン耐性株からプラスミドDNAを回収し、どれくらいのサイズのDNA断片がベクターに挿入されているか制限酵素による切断とゲル電気泳動により確認するというものです。 課題ですが、「今回の実験で白色コロニーからプラスミドDNAを回収したが、ベクターに挿入DNA断片が入っていなかった。また、薄青色コロニーからプラスミドを回収したところ、DNA断片が挿入されていた。この理由をベクターのクローニング部位の切断面、lacZ遺伝子と挿入DNA断片との連結状態に注目して説明せよ。」というものです。 正直、生物の実験は初めてで良く分かっていないところも多く、難しいです。アドバイス、ヒント等よろしくお願いいたします。
- 締切済み
- 生物学
- 組換え体のカラーセレクション。。
遺伝子を導入した株を見分けるためのカラーセレクションの実験をしました(学生実験です)。lacZがあればX-GALを分解して青いコロニーを形成するが、他の遺伝子が導入されていれば分解できず白いコロニーを形成するってやつです。有名な方法らしいのでとりあえず詳しい説明は省きます。。 で、寒天培地に菌を植えるときに、X-GALの他にアンピシリンも入れるのはなぜなのでしょうか?lacZのところに外来の遺伝子が導入されているかどうかを調べるためにどうして抗生物質のアンピシリンを入れるのでしょう?実験のマニュアルをよーく読んだのですが、いまいち理解できなかったので教えてください(泣)。
- ベストアンサー
- 生物学
- サテライトコロニー?について
こんばんは。 初めて質問します。よろしくお願いします。 大腸菌のトランスフォーメーション実験を行い、アンピシリンとX-gal染色によりセレクションしました。 白色コロニーをコロニーPCRにかけるために選ぶ際、指導者に、サテライトコロニー(?)は白色でも正しくトランスフォーメーションされていないことが多い、と言われました。 サテライトコロニーとは、1つの大きなコロニーのまわりに小さな飛び散ったようなコロニーが見えるもののことを指すらしいのですが。 なぜ、正しくトランスフォーメーションされていないのでしょうか?確かにコロニーPCRでは増幅されませんでした。 指導者はその理由は忘れてしまったそうです(-_-メ) 調べても中々わかりません。 どなたかご存知でしたら教えてください。 参考URLでもかまいません。 よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 大腸菌の形質転換について質問です。
大腸菌の形質転換について質問です。 X-GalとIPTGと形質転換した大腸菌をまいたところ、青コロニーが全く出ませんでした。 この原因は何が考えられるのでしょうか? 自分の中で一つ気になるのは、PUC19ベクターを使ったのですが、ベクターを調整した後電気泳動でベクターを確認したところかなり薄かったことです。 もし、ライゲーションした時にベクターが全く入っていなかった状態だと、コロニーはどのようなものが現れるのでしょうか? 何かわからないことがあれば、補足させていただきますので、質問の回答よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
お礼
そうですね。 確かに、コロニーが白色になるという事は、挿入断片があるということですね。 微小な断片の出所がどうなっているのか気にはなりますが、 『何かの拍子にできてしまったごく小さな、 それこそ電気泳動では判らないような小さな断片が挟まってしまって それでコロニーが白くなってしまった』というのは合理的ですね。 それなら、ベクターのみのものと、区別はつかないですね。 「DNAの混入」だとするのなら、 なんとかそうならないように気をつけるしかないですよね。 ollinさん、ありがとうございました。