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初めてサザン法を行い、またそれに使うDNAプローブをPCR産物から作るのですが、疑問があります。 (1)DNAを一本鎖にするために、熱変性し、キットを用いて標識するのは分かるのですが、それを氷上において一本鎖に保ちます。それを、ブロッティングしたメンブランにアプライするわけですが、いくら一本鎖にしたといえ、プローブ同士が二本鎖になることはないのでしょうか？ (2)上記のようにPCR産物から作成したプローブはセンス鎖もアンチセンス鎖も混ざっているというわけですよね？ (3)泳動した二本鎖DNAのゲルをアルカリ変性させ一本鎖にしますが、これをメンブランに移したということは同程度のバンドの位置に解離した二本鎖があるわけで、そこにプローブ（アンチセンス鎖もセンス鎖も含む）をアプライしたらバンドは二本観察されるのではないのでしょうか？ 初心者的な質問で恐縮ですがよろしくお願いします。

仕事での焦りやストレス、失敗、罵声や人間関係で鬱状態になり、早や一ヶ月休職してます。仕事は三ヶ月前にようやく採用になった電気工事関連会社。 未経験なところが多く、教えてすぐ出来ないと罵声や俺はすぐに出来たのに、ボッとしてるからだ！ と責められます。 私も頑張るんだと歯を悔いしばって自分なりにやっては来ました。が数多い種類の作業をすぐに覚えなきゃ行けないプレッシャーがかけられ、失敗やうまく出来なかった事から自己嫌悪が増幅し、睡眠障害、注意力、集中力低下、食欲不振、動悸、めまい、だるさが発生し、ついに我慢出来なくなり、医者を調べて心療内科に勇気出して行ったのが経緯です。こう鬱剤、安定剤、睡眠薬の処方と休養が治療です。 共働きの妻に申し訳なく、家事など出来るだけやったり庭の掃除、毎朝息子二人で30分散歩している日々です。 その位しなきゃ申し訳ない気持ちでやっていますが、以前、医者より義務的にやらなきゃって思ってするのは良くないと言われました。 いつ復帰出来るかもあなたの気持ちが次第ですと、言われ 解雇や自然退職があるのではと焦りが募ります。休んでいる期間は無休で傷病手当手づづきも最近行いました。自立支援医療費申請も最近申込みしました。また以前の失業の積み重ねが原因で今、個人再生申請中の身です。あと糖尿病、椎間板ヘルニア持ちと底辺に沈んだ感じです。 少しづつでも出来る事からしなきゃいけないと言う考えは鬱病の場合、マイナスナノですか？ 毎日なんか家でもゆったり出来ず、休み続けてる事への後ろ目たさがあり、ソワソワして落ち着きません。でも生活の為、仕事しなくてはいけないのですが仕事への恐怖からまだ覚めてないので、過呼吸や動悸、ダルくて動けなくなる時もあります。 今の状態は自分でもどうしたらベストなのかわかりません。 最近は夜に飲むパキシルが10→20→30と増えてます。後はワイパックス0.5を毎食後一回と寝る前にロヒプノール1を服用してます。

ども<(_ _)> さて、私は30代の♂、小学校3年生の息子と一緒に、 川釣りをしたいと考えてます。私も30年ぶりぐらい(^^;) で、餌釣り、ルアー、フライフィッシングと段階を得ていきたいと思ってますが、初心者用のお勧め解説本など、心当たりありませんか？ まずは竿から買って（そこからかっ！）と思ってます。 ※知り合いに経験者がいると早いのですが残念ながら(涙) ご紹介いただける初心者入門編などありましたら、 お知らせいただければ助かります。(*- -)(*_ _)ペコリ

事務所がふたつある会社です。 一つは上司と私、その上司の弟であるかた、 もう一つには4人ほどのプログラマさんがいます。 私（28歳女性）とその上司（34歳男性）は 常に二人きりで、事務所にいます。 弟さんは、外で仕事したりしていて、あまり寄り付きません。 上司とほぼ二人きりで事務所に詰め、一年がたち、正直、本当にキツいな～と思っております。 上司は34歳ですが、オヤジで、下品で、独り言が多く（その多くはパソコンへの罵倒）、常に頭を掻いていて、へんな歌を歌っています。 たまにエロい話を振って来ます。 しかしながら、高学歴なので、超えらそうです。 そもそも、プログラマさんたちが別の事務所を作ったのも、 一緒にいられないからっぽいです。 でも私はプログラマさんたちの事務所にはスペース的にもう入れなさそうです。 ていうか、そうすると、もとの事務所に上司一人になります。 それは、なんだか、まずいです。 仕事内容的には不満もなく、給料にも満足してるので 辞めるつもりはないです。 しかし、表面上うまくやるだけでストレスがたまってしまっています。 なるべくかかわらないようにはしているのですが。。 最近、梅核気？というものになったのも上司が原因と確信しております。 どうやってストレスを軽減したらよいでしょうか？ ちなみに、うちの会社は、3人の上司がそれぞれ専務取締役という形で トップがいません。

音楽録音用CDーRというのがありますよね　それについて質問です あれはどうやって使うんですか?

彼女はアレルギーのため、耳の周りや中が常に炎症を起こしていて、かゆみのために掻いてかさぶたができたり、みみだれが出たりそれが固まったりしています。病気なのは仕方ないのですが全然病院に行かないし（飼い犬は病院に連れていくのに）つねにかゆみのためにいつも癖のように耳に手がいって、掻いたあとにかさぶたが取れて服についたりしています。 早く病院に行って治してもらうように言っているのですがもう２年になります。 デート中もよく耳触っているし、かさぶたが床に落ちたりしています。 外からみても耳の周りが炎症になっていて痛いたしいのです。 私としては性格は好きなのですがそういうところが生理的に受け入れずらくなってきました。 あなたの彼氏、彼女がこんな感じならどうしますか？再三、病院に行くようには言っているし、その時は行くって彼女も言うのですが

自分の甘えや考え方の浅はかさに嫌になる毎日です。こちらに書いてしまってよいのかわかりませんが、アドバイスや御意見を頂けたら幸いです。20代後半で、つい最近、結婚しました。女性です。 大手企業を結婚を機会に辞め（遠距離恋愛だったので）、今は契約社員ではたらいています。転職先は、小さい頃から憧れの世界だっただけに、希望を持っていました。でも、駄目でした。。。。 前職はうつ病を経験し休職もしました。 大手のプレッシャーに負けて、ずいぶん泣き言もいいました。 結婚が理由で退職はしましたが、正直、はやく前職を退職したかっただけかもしれません。 で、今。転職を後悔しています。前の会社がいかに環境に恵まれていたかわかったからです。 現在、通勤２．５時間（片道）で辛いです。風土的に、残業が美学とされているため、帰宅もしにくいです。 サービス残業です（前職は一切サービス残業を許さなかった）。 子供がいる家庭の女性でさえ（派遣さんです）残業をしています。 私は子供もいないのに、家事が大変なんていえないです。（旦那には家事をさせたくないという考えがあります。育った環境だと思いますが）定時に仕事を切り上げても、帰ってくるのは９時半過ぎ。プライベートもなかなか作れず、前職の鬱前の状態にだんだん近づいているような気持ちさえします。（現に体調を崩してばかり。頭痛や吐き気がしょっちゅうです。暴飲暴食も酷く体重もかなり増えました。病院にはいってません。） 旦那は、さっさと辞めて、家の近くの会社で派遣で仕事をすればいいじゃないか、パートでいいじゃないかといってくれています。私もそうしたいです。でも、無意味なプライドがあります。何のために大学を出たんだろう。。親に申し訳ないし、自分は何をやっているんだと思う毎日です。 このご時世、仕事があって、しかもそれなりのお給料。通勤時間２・５時間だって文句を言ってはいけないと思う。だけど、私は、文句ばかりを言ってしまいます。体もうまく、気持ちのコントロールも儘ならなくなってしまいました。 でも、周りが気になって、人と比べては、なんて甘いんだろう、なんてわがままなんだろう。と自分を情けないと思う毎日です。 ＴＶや新聞で雇用の厳しいニュースをみては、さらに拍車がかかります。こんな辛い時代なのに私は一人、何を言っているんだろう。って。 現に、友人にさらっと悩みを相談しましたが、「甘いよー」と一蹴されて終わりました。自分でも情けない限りですが、こんな苦しみから抜け出したいです。どうしたらよいのでしょうか・・・。 どうしても他人のものさしで諮ってしまい、どうしても、自分は自分でいいじゃないかとは思えません。 結局、わがままの、甘えちゃんなだけジャン・・・と思ってしまいます。せめてせめて攻めまくり、自分なんて消えちゃえばラクなのにと思うときも時々あります。夜眠る前、朝会社に行くとき、かえるタイミング（こいつは早く帰って何してんだかと回りに言われているようで怖い）、が一番辛いです。

私が働いてる会社の取引先の中で、三菱重工業（MHI）という会社もあります。 世界的な規模の重工業会社の中で、三菱重工業の位置はどのぐらいなるんでしょうか。 たとえばドイツのSIEMENSと比べて、または韓国のSAMSUNG重工業とかHYUNDAI重工業と比べて、どちがもっと大きな会社のかが知りたいです。 教えてください。

私はずっといじめられていました。 元はいじめられるようなタイプじゃなくて でも２年生の後期らへんから だんだん皆からはずされて相当辛かったです。 そしてやっとクラス替えで新しく友達も できたのに今日、２年生のときにいじめられた子から ホームページに悪口を書かれてあったのを 見つけてしまいました。 「顔面ぐちゃぐちゃにしてやりたい」 とかもう怖いです。 もう何にも文句言われるようなことしてないのに なんで…って思います。 私が楽しそうにしているのを見られたりすると いつもすごい目つきで睨まれます。 何か気に食わないんでしょうか？ 何かホームページはみんなも見てるので皆から嫌な目で見られたり また友達が減っていくんじゃないか、とか 色々心配です。 せっかく学校に楽しく行けるように なったのにすごい怖くなりました…

わさびがツーンときますよね。 あれの科学的説明がしりたいです。 ぜひお答えください。

legitimacy theoryとはどういう理論なのか教えてください。インターネットで検索をかけてもdefinitionがでてきません。

(1)失敗の原因や対策 (2)一度エラーが出たディスクは再挑戦できるのか について具体的なご指導を頂ければ、幸いです。 WindowsXP(SR3)、ImgBurn(ver:2.4.2.0)にて、今まで何度か Write files/folders to discで、書き込みすると、たまに 失敗することもありましたが、それなりに使えていました。 ここのところは、5枚以上、連続して失敗しています。 DVD-Rメディアは、今まで、マクセルか三菱の1-8倍速から 失敗を少なくする目的で、ショップで信頼度がより高かった TDKのデータ用1-8倍速(50枚単位)に変えましたところ、 失敗(×)、成功、×、×、×、×、×　 となっています。 エラー時のダイアログは常に下記が出ます。 尚、ウィルスソフトは停止させておりまして、一度だけですが、 Test Modeで行ったところ成功し、その直後にVerifyで行うと 同じダイアログでのエラーとなりました。 ------------------------------------------------------------- I/O Error! Device:[1:0:0]PIONEER DVD-RW DVR-104 4.20 (F:)(ATA)ScsiStatus:0x02 Interpretation:Check Condition CDB:2A 00 00 00 03 00 00 00 20 00 Interpretation:Write(10)-Sectors:768 - 799 Sense Area:71 00 03 00 00 00 00 0E 00 00 00 00 73 03 00 00 00 00 2B 42 10 00 Interpretation:Power Calibration Area Error

ＳＥをしていますがプロマネばかりの作業ではいつまでも雇われの身です。 いつかビジネスを立ち上げたいと思っています。 そのためにはプロマネのようなジェネラルなスキルよりは、コアな技術を持ちトレンドを読む力を体得している人材の方がビジネスモデル確立時に強い力を発揮するのではないかと感じています。 当面は長いプロジェクトがあるのですが、何もしないのは時間が勿体ないのでアンテナを立てておきたいと思っています。 おすすめの書籍や雑誌があればご教授ください。

こんばんわ。 私は３０代女性です。 これまで何度かお見合いをしたことがあるのですが、その際に仲人さんい注意を受けました。 曰く、もっと華やかな服を着なさい、とのことでした。 私はグレイのＶニット、黒のスカート、黒ブーツ、アクセサリーはつけてませんでした。 季節的に冬なので黒っぽい服装になりがちですが、お見合いの際は明るい色の服（赤やピンク系）のほうがいいのでしょうか？ 写真は赤色の服のほうがいいと聞きました。 また、髪はアップのほうが印象が良いと聞きますが・・・。 個人によって、合う合わないがあるでしょうが、ごく一般的に男性ウケがいい服装が知りたいです。 服装の好みは男性と女性では違うと思うので、教えて頂ければ参考にしたいです。 お願い致します。

英訳をコメントしてください。 １．グループ会社構想 ２．資本政策 ３．予実フォロー（予算実績フォロー） ４．規定集チェック １．Propsal to　be group company ２．Financial　proposal　for　IPO ３．Monthly　review　the　difference　plan　and　result ４．Review　of company regulation

情報処理推進機構、基本情報技術者試験(FE)の午後問題はさすがに文章が多すぎませんか？ 昔より読む速度はかなり上がっていますが、それでも考える時間はあまり取れずに何問も感で答えるしかありません(昔はテロップが読めないこともあった)。 他の方は全て読んで答えているんでしょうか、それとも飛ばし読みしたほうがいいんでしょうか。 でも、読まないと解けない問題ですよね。 時間は計っていますし、問題を先に少し見てから問題文を読んでいます。 どうもこの悩みは他で見つけることが出来ませんでした。国語で読む速度を鍛えたほうがいいですか？ 試験に落ち続けています。

受験間近の高校三年の者です 英語の偏差値は60ぐらいです 最近過去問の英語長文で 自分では読めていると思っても内容一致問題を外してしまうことがよくあります 赤本のアドバイスなどを見ると精読することが大切と書いてあるのですが「精読する」という言葉がイマイチわかりません 具体的には何をすれば「精読」できるのでしょうか？ 早めに回答して頂けたら嬉しいです

パソコンで遊べるシミュレーションゲームを探しています。 自分は電車でGOやA列車シリーズ、FSXなどは知っているのですがそれ以外でオススメのゲームがありましたら教えていただきたいです。 都市開発、運転や操作などをするゲームなどです。 自分のパソコン環境 マザーボード　STRIKER EXTREME（定格） CPU　CORE2DUOE6850 メモリ　2GB（コルセア） グラボはGTS250を今週買おうか検討中・・・ 電源ユニット500ｗ FSXをするには厳しい環境かもしれませんが宜しくお願いいたします。

私にはうつ病の兄がいます。 現在、兄は無職で、家でずっとネットゲームばかりしています。 1日の半分以上の時間をネットゲームに費やし、 外へ出ることはほとんどありません。 うつ病なので、少し好きなことをやらせてやるほうがよいかと思い黙っていたのですが、 ゲームをやるために無駄遣いをすることが多くなりはじめました。 ネットゲームで課金制のアイテムをクレジットカードで購入したり、 オークションで昔の古いゲームを購入したりしております。 つい最近は、使っているパソコンではゲームをする速度が速くないから、 新しいのを買いたいと言い出しました。 そのパソコンも20万円近くもする高価なパソコンを買いたがり、 ゲームをやるためだけに高価なパソコンを買うことはよくないと、 注意すれば切れてわめき倒します。 買うにしてもお金はどうするのか？と尋ねると、 クレジットカードのリボ払いで買うといいます。 無職で収入がないにもかかわらずリボ払いで買うことの危険性を 兄が落ち着いたときにきちんと説明しました。 一度は本人も納得して買わないといっていたのにもかかわらず、 3日後にはパソコンをリボ払いで購入しておりました。 カードは無職になる前に作った自分名義のカードですし、 現在、無職とはいえ内職をしたりしているので、 月々2,3万の収入はあるようなのでその範囲内であれば、 特に注意する必要性もないかと思ったりもします。 しかし、うつ病とはいえ、ゲームばかりの偏った生活に無駄遣いをしている姿を見ると、 このままでは社会復帰ができない状態になるのではと思い、 今回、ご相談をさせていただきました。 ただ、面と向かって注意をすればわめき倒し、暴れます。 やんわり注意をすれば、そのときは納得したように見えても、 その後の行動から見て、本当は何も理解していないように思えます。 このような場合、どのような方法で注意をすればよいのでしょうか？ また、どのように今後、接していくのがよいのでしょうか？ 何かしらのアドバイスをいただければと思っておりますので、 何卒、よろしくお願いいたします。

現在2歳の子供が一人、そして間もなくもう一人子供が産まれます。 6月半ばに旦那から別居、そして離婚を言われ一時家庭内別居～7月はじめに実家に帰り別居していました。 ただ、私が現在妊娠中（9月初め出産予定）で旦那から少しはやり直す気持ちが出てきたことを7月10日頃に言われ、7月2週目くらいに戻ってきました。 旦那の離婚という気持ちはまだ完全に戻っていない（女性としての魅力は感じるが妻や母としてはまだ認められないらしいとのこと）ので家庭内別居は継続で、それでも週1から2くらいでＨは求めてきます。彼曰く、「俺は好きじゃない人とはＨできないししない」と言っていました。 旦那との関係が良くなるように、家庭のことや旦那に対しても良き妻、良き母親として身重ながら頑張ってきました。切迫早産と診断されて会社も4週間ほど早めに休みをもらって、体がきつい中も認めてもらいたい、子供や自分の為にも離婚をしないほうが良いと思って家事育児弱音をはかずここ1か月半頑張ってきました。 ですが、つい一昨日旦那が無造作に置いていた携帯をつい見てしまい。離婚を言い出したころに彼女候補がいたこと、相手は水商売なのか「お客さんとはキスをしない」というところからの想像ですが・・ よく相談している相手にメールで教えていました。相手からもらった携帯ストラップも最近までずっとつけていました。（今まで携帯ストラップなどつけていなかったので怪しいとは思っていましたが・・） ただ、相手とのメールや電話でのやりとりがあるのかはわかりません。短時間でしか見ていないので。。 もし、旦那に女性の影があるのであれば、やり直したい気持ちも半減だしこれからつづけていけるか、まして子供が妊娠中でも離婚を切り出したことを考えれば、相手と旦那に不貞行為があることをみとめさせ反省もしくは離婚を考えた方がいいのかと思うようになりました。 今の時点で、家庭内別居をしているので怪しい行動は把握できません。 ただ、今度飲み会があるから、そのときは相手できないから（私も子供も）実家にでも帰ってきたらと言われたくらいです。 もしその時に浮気の現場を押さえることができるのであれば調査をしてもらった方がいいのでしょうか？ 旦那はいつも飲み会の時は1次会くらいで私に迎えを頼んでいたので、何時に帰るかわからないと言っている今、相手と会う可能性が大きいと思っています。 もし調査を依頼する場合、お金は結構かかるのでしょうか？自分で調べれば安上がりなのでしょうが、妊娠中と子供が小さいのと旦那の親と同居なので出かけることはできません。調査にはだいたいいくらかかるものかまったく想像がつきません。 もし離婚となった場合、相手に不貞行為がみつかれば調査費用なんかも請求できるのでしょうか？