免疫染色の方法について
マウスの副腎の免疫蛍光染色をしようと思っています。
自分なりに考えた染色の方法を書くのでおかしいところや改善したほうが良いところを指摘していただけるとありがたいです。
副腎凍結切片（パラホルムアルデヒド固定）
PBS洗浄 ×３
１０ｍM glycine-PBS(5min×３)
PBS洗浄
0.1%TritonX-100/PBS (RT,15min)
PBS洗浄 ×３
３％BSA-PBS （RT、３０min）
１０ｍM glycine-PBS(5min)
0.1％BSA-PBS(5min×３)
mouse-anti Ki67(1:50/1%BSA-PBS) (4℃、over night)
0.1％BSA-PBS(5min×３)
donkey-anti mouse Cy3(RT,60min)
0.1％BSA-PBS(5min×３)
F(ab')2 donkey-anti mouse(RT,60min)
0.1％BSA-PBS(5min×３)
rabbit-anti P450aldo(1;100/1%BSA-PBS)
mouse-anti P45011β（1;125/1%BSA-PBS）(4℃、over night)
0.1％BSA-PBS(5min×３)
goat-anti mouse Alexa488(1;100/1％BSA-PBS)
donkey-anti rabbit Cy5 (1;200/1％BSA-PBS)(RT,1hr)
0.1％BSA-PBS(5min×３)
封入
以上です。長い文章ですがお願いします。
お礼
ありがとうございます。 仕事場で先輩に聞くのも忙しそうで、なかなか納得できる答えが得られませんでした。 聞いても、的を得ないでますます混乱していました。 投稿してから、自分でも関連の質問集を探して何度か読み返しているうちに、おぼろげながら理解 してきた感じでした。 早速サイト開いてみました。参考になりそうです。 そういえば職場にその企業のカタログがありました。 本も参考にしたいと思います。 大変助かりました。！！！