MIYD の回答履歴

大学の授業に関連したある問題が理解できません。 文だけで説明しにくいのですが… PCR法についての問題です。 2つのプライマーと耐熱性ポリメラーゼを用いて、温度を適当に変化させることによるDNAの複製反応を30回繰り返した後、電気泳動によりDNAの分析をするとどれくらいの長さのDNAが検出できるか という問題です。 図もあって開始コドンのあるエクソン１は300bp、イントロン１は300bp、イントロン２は550bp、そして終始コドンだとかあるんですが、 この問題の考え方を教えてください。 質問がわかりにくくてすみませんがお願いします。

大学の授業に関連したある問題が理解できません。 文だけで説明しにくいのですが… PCR法についての問題です。 2つのプライマーと耐熱性ポリメラーゼを用いて、温度を適当に変化させることによるDNAの複製反応を30回繰り返した後、電気泳動によりDNAの分析をするとどれくらいの長さのDNAが検出できるか という問題です。 図もあって開始コドンのあるエクソン１は300bp、イントロン１は300bp、イントロン２は550bp、そして終始コドンだとかあるんですが、 この問題の考え方を教えてください。 質問がわかりにくくてすみませんがお願いします。

ある植物からすでに性質が明らかにされているA酵素を精製したい。まず、植物の抽出物(1000ｍL)を得た。この抽出物中にはB,C,Dという酵素も含まれている。A酵素は3回のカラムクロマトのステップで精製できる。A酵素を精製するための最も効果的精製手順を4項目の箇条書きにせよ。ただし、A,B,C,D酵素それぞれの性質は次のようである。 A酵素（等電点：5.6　分子質量：37ｋD　pH安定領域：pH5～8） B酵素(等電点：4.8　分子質量：30ｋD　pH安定領域：pH4～７) C酵素(等電点：5.9　分子質量：65ｋD　pH安定領域：pH5～8) D酵素(等電点：9.0　分子質量：35ｋD　pH安定領域：pH7～10) ゲルろ過クロマトグラフィーやイオン交換クロマトグラフィーを使うのだと私は思うのですが、ちょっとよくわからないのでわかる方がいましたらお願いします。 決してレポートとかではありませんし、どんな方法が一番有効なのか是非知りたいのでよろしくお願いします。

最近、研究室の友人がPCR後の増幅された遺伝子のサンプルを翌日、翌々日に電気泳動させています。 PCR後の遺伝子は凍結保存してどのくらい持つのでしょうか？お願いします。

ー８０℃で保存していて一度全て解けてしまったタンパク質のグリセロールストック（酵素や酵母など）は、もう使えないのでしょうか？

細胞毒性試験を行っています。 増殖せずに丸いままになることがあるため、 その細胞は死んでいるのか生きているのかを、簡単にトリパンブルーで染色してみたいと考えています。 試してみたところ、細胞数が少ないため、うまく回収→染色できませんでした。 細胞数が少ない場合、この方法ではやはり難しいのでしょうか・・・。 できるだけスケールは変えずに実験したいと思っています。

今回、仕事でプラスミドDNAの制限酵素処理を行うことになりました。 私は分子生物学等の知識に乏しく(医療系出身ですので・・・)、いろいろな実験書や参考書を調べてみたのですがどうしてもわかりません。 うまく説明できませんので、あるページから例題をおかりしましたので、掲載させていただきます。 例題)　大腸菌 DNA を pBR322 の EcoRI 部位にクローニングする。次の問題に答えよ。但し，EcoRI 制限酵素１ unit は，λファージ DNA １μg を，0.1M Tris・HCl，ｐＨ7.5，7mM MgCl2，50mM NaCl 中，37℃，１時間で完全に切断する活性として定義される。λファージ DNA は 50 kbp あり、EcoRI 部位は５カ所ある。 大腸菌 DNA を pBR322 の EcoRI 部位にクローニングするのに，10 μg の大腸菌 DNA を EcoRI 処理したい。必要最少量の 10 倍量の EcoRI を加えるとして，何 unitの EcoRI が必要か。反応は，37 ℃, 12 時間行うことにする。 計算方法等をわかりやすく教えていただけると幸いです。 基本的な質問で申し訳ないのですが、よろしくお願いいたします。

オンラインでプライマー設計ができるPrimer3（http://frodo.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3.cgi）というものを使えるようにしたいのですが、使い方がさっぱり分かりません。どなたか使い方を教えてください。

ＤＮＡのreplicationでlagging strandにhelcaseと結合したprimaseがＲＮＡprimerを作りますが、どのくらいの間隔(例えば５０塩基ごととか・・)で作るのでしょうか？ primerは１種類ですか？だとしたらそのprimerのシークエンスに相補的な部分に結合するのはわかりますが・・・。 愚問すみません。

１．恒温装置を用い、水の温度を４２℃にする。 　２．チューブ２本(ピンクと白)と形質転換溶液を氷水中につけて冷やしておき０℃の温度を確保する。 　３．火をつけたガスバーナーのそばで大腸菌を両方のチューブにそれぞれ加える。 　４．ピンクのチューブにプラスミドを加える。 　５．氷水上に１５分間入れ、速やかに４２℃のお湯に静置する。１～２分後、すぐに氷水中に戻し２～３分間する氷冷する。 　６．SOH培地溶液２６０μℓを両チューブに加える。 　７．３７℃のインキュベータ内で１５分間静置する。 　８．LBプレートを１番、LB/ampプレート３枚を２～４番とする。 　９．３番のLB/amプレートに、X-galを入れる。 　　　　　１番　LBプレート 　　　　　２番　LB/ampプレート 　　　　　３番　LB/ampプレート＋X-gal 　　　　　４番　LB/ampプレート 　10．プレートを逆さにし、３７℃のインキュベータに入れ、１日間静置する。 という実験をしたのですが、２番で大腸菌が検出され、３番と４番には色がついていませんでした。これはどういうことですか？教えてください。

植物のゲノムDNAの抽出を行っています。 ところが、最後のエタ沈の段階でDNAがゲル化し、 溶けにくくなって困っています。 （濃度の高いDNA溶液を作りたいため） 方法はCTAB、SDS共試してみましたが、同じようにゲル化してしまいました。 何かいい方法はないでしょうか？

お世話になります. ある遺伝子において,第1Exonより前の領域をPromoterと呼ぶと思うのですが,最終Exonより後の領域の名称は 何なのでしょうか?

PCR product をフェーノール／クロロホルム抽出とクロロホルム抽出の後にエタノール沈殿をして回収しようとしました。 PCR後に、アガロースゲルで目的DNAが増幅されているのは確認できていたのに、エタノール沈殿でDNAがでてきません。 実験の大まかな流れは、PCR→アガロースゲルでチェック→フェノール／クロロホルム抽出→クロロホルム抽出→エタノール沈殿といった感じです。 どうすればうまくエタノール沈殿ができるでしょうか。 だれか教えてください。