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質問させてくださぃ！！ ウエスタンブロットの ブロッキング→１次抗体をつける→２次抗体をつける という流れを詳しく教えてほしいです。 ブロッキングはスキムミルクをT－TBSに溶かしたものをタッパーに入れて揺らしたらいいんでしょうか？？ １次抗体はラップを引いてその上に１次抗体とキャンデットシグナルをたらしメンブレンをつけるので合ってますか？？ ２次抗体はどのようにつけるのでしょうか？？ 間に挟むWASHについても教えてほしいです。 よろしくお願いします！！！

ウエスタンがどうもうまくいきません。 最終的に発色させると、バックグラウンドのみが発色し、タンパク部分が白く浮き出てきてしまいます。タンパク量の問題なのかと考え、0.25、0.5、１、３、５、10、20μgで試してみましたが、タンパク量に関係なく同様の結果になってしまいました。 一次抗体は100倍希釈(濃すぎでしょうか？)、二次抗体は、500倍、1500倍、2500倍希釈で試しましたが、いずれも同様の結果です。 ブロッキングの回数やブロッキング剤の問題でしょうか・・・。 同じような経験のある方、またその問題を解決された方、アドバイスよろしくお願いします。

下記英文の大意をおしえてください。 We have examined the agonist-dependent internalization of FLAG-tagged muscarinic acetylcholine receptor M4 subtype (M4 receptor), which was transiently expressed in HEK293tsA201 cells. We had presumed that the internalization of M4 receptors would be enhanced by coexpression of G protein-coupled receptor kinase 2 (GRK2) as was the case for muscarinic acetylcholine receptor M2 subtype (M2 receptor), because M4 receptors as well as M2 receptors have two Ser/Thr clusters in the third intracellular loop (i3) which was supposed to be phosphorylated by GRK2

ブロッコリーと小松菜とブタのレバーの塩基対と電荷が分かりません。 本とかねっとで調べてもわかりません。 誰か教えてくれませんか。

細胞膜の免疫蛍光染色にコムギ胚芽凝集素と蛍光色素を結合させたものを使うみたいですが、そのときのコムギ胚芽凝集素って何のために結合させているのですか？ ご存知の方、宜しくお願いします。