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現在、蛍光染色を行なっております。 線維芽細胞をビメンチン、サイクリンB1で染めていますが、 ビメンチンはきれいに染まるのですが、サイクリンだけ染まりません。 サイクリンB1なので、核が染まるはずなのですが、何度やっても核以外の部分が染まってしまいます。Triton処理を行なっているので、膜は透過して、核まで染まると思うのですが。 染色手順は以下のとおりです。 4%アルデヒド固定→wash out→0.01%Triton-X→wash out→1%ヤギ血清にてブロッキング→anti rabbit cyclin B1→一晩室温→Alexa488 よろしくお願いいたします。

トリチウムラベルのリガンドを用いた一般的なレセプターバインディング実験では、たいていBufferにモリブデン酸ナトリウムが入っています。 モリブデン酸ナトリウムは何のために入れているのでしょうか？ また、よくあるBuffer組成で、こんな目的のためにこれを入れるというのがあればあわせて教えてください。

こんばんは。 ウエスタンブロットについて行き詰っています。 実験で1次抗体にβ-アクチンを使用しているのですが、 どのような意味があるのでしょうか？ β-アクチンを使用することから、予想される目標物質とは何があるでしょうか？ よろしくお願いします。

マクロファージのS100 extractを用いた実験が多々ありますが、 S100の「S」とは一体何を表しているのでしょうか？ 沈降係数なのでしょうか？ また、S100 extractを用いることの意義とは何なのでしょうか？ 基本的なことかもしれませんが、調べはじめたばかりで このところを詳しく書いてある資料が見つからなくて…

発現ベクターに目的遺伝子（グルカナーゼ）を導入して発現実験をしています。培地にグルコースを入れるとカタボライト抑制がかかると先輩に言われたのですが、発現ベクター内には目的遺伝子のみ（制御系タンパクなど入れていない）しか入っていません。なぜカタボライト抑制がかかるのでしょうか。どなたか教えてください。