PCRで使うプライマーの希釈濃度について
- PCRで使うプライマーの希釈濃度についての質問です。収量２０nmolの乾燥プライマーをTEで溶解し、最終的には10pmol/μlの濃度で使いたいと考えています。
- 200μlのTEで溶解すると、溶液の濃度は１００pmol/μlになります。この溶液を１０本に分注して保存し、１本を２０００pmol/μlに希釈することで１０pmol/μlの濃度を作ります。
- PCRの反応液には０．４μlのプライマーを使いますが、１本分注した場合には500ウェル分の反応液ができることになります。質問者はこのような大量のプライマーができることに不安を感じており、計算に何かおかしいと思っています。
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プライマー溶解 希釈濃度
収量２０nmolの乾燥プライマーをTEで溶解するのですが、最終濃度は10pmol/μlで使います。 この場合、200μlのTEで溶解すると、１００pmol/μl。これを１０本に分注して保存。 １本は20μlで２０００pmol/μl。１８０μlのTEを加えて全体を２００μlにすれば１０倍希釈で、１０pmol/μlになります。 PCRで１ウェルあたりの反応液に使うプライマーは０．４μlです。 分注した１本で500ウェル分？！ こんなに沢山できちゃうものでしょうか？ 大変不安になっています。 私の計算がどこかおかしいのでしょうか？ すみませんが、検証していただけないでしょうか・・。 どうぞよろしくお願いいたします。
- powergene
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>１本は20μlで２０００pmol/μl → 100pmol/μl （あるいは 2000pmol/20μl） が正しいですが、なぜかその後の計算はあってるのでタイプミスでしょうね。 最終 10pmol/μl で使用し、１ウェルあたり0.4μl使用 ということは、１ウェルあたり 4pmol 使用することになりますね？ もともと20nmol あるのですから、20nmol ÷ 4pmol ＝5000 ウェル分 １０本に分注してるので500ウェル分で、計算はあってますね。 １ウェルあたり使用するプライマーが0.4μl、が合っているなら、間違いないでしょう。 他の質問も見てみましたが、 http://questionbox.jp.msn.com/qa1836835.html だいたい1000ウェル分くらいは取れるみたいだし、合ってるんじゃないでしょうか。
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