液体クロマトグラフィーを用いた物質精製の方法について

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このQ&Aのポイント
  • 海綿動物の水溶液抽出液からヒトの免疫能力を高める物質を精製する方法を調査した。
  • SDS電気泳動と等電点電気泳動を用いて、精製画分内のタンパク質成分を解析した。
  • 液体クロマトグラフィーを適用することで、４種類の成分を単離することが可能である。
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液体クロマトグラフィーについて

　ある海綿動物の水溶液抽出液の透析内液(排斥限界分子量１万）から、ヒトの免疫能力を高める作用をもつ物質を精製し、部分精製標品を得た。この画分をSDS電気泳動に供したところ、４種類のタンパク質性バンドＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄが検出された。この内ＡとＣはPAS染色に陽性で糖タンパク質であることが分かった。一方、等電点電気泳動では、３種類のバンド(PI4.2、5.6、8.2）が検出された。そこで、液体クロマトグラフィーを用いて、この部分精製画分中の４種類の成分をそれぞれ単離することにした。どのような精製法を用いればよいだろうか。というレポートが出されました。私は、このような実験をしたこともなく、どういった解答をすればよいかも分かりません。誰か解き方だけでも教えてください。お願いします

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  • nitscape
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回答No.1

SDSで4つ、pIで3つのバンドになっているのならもしかしたらゲルろ過で一発かも．．．といったらバンザイですがレポートならそうもいきませんね。採点基準として考えられるものを挙げてみます。あくまで私の考えですが。 pIが離れているので陰イオンカラムと陽イオンカラムにかけたらABCDのどれがスルーしてくるか？カラムに残りグラディエントで分離できるか？カラムとバッファー（グラディエント）は何を選択するか？ 糖タンパクに対するアフィニティカラムを用いた分離。カラムとバッファー（グラディエント）は何を用いるか？ サンプルの濃縮。どのようにサンプルのタンパク溶液の容量を減らすのか。 分子量の違いによるゲルろ過。分子量順にどのように出てくるのか？現れた合計ピーク数が3つ（4つ）ならなぜか？そのピークはシャープ（なだらか）なのはなぜか？ 各段階における精製率を求めるためのタンパク質濃度の決定にはどのような方法を用いるか？

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