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培養細胞のギムザ染色のコツ
培養細胞のギムザ染色を行っていますが、 なかなか綺麗な染色を行うことができません。 現在は、培養液除去→PBS洗浄→すぐにメタノールで90秒固定→ PBS洗浄→完全に乾燥→PBSで10倍希釈したギムザ、37度60分→洗浄 でやっています。 多くの参考資料を見ると、 「メタノール固定前に乾燥させる」との記載と、「なるべく乾燥させない」 と両方の記載があり、羊土社の文献にはエタノール固定なる方法が乗っています。 綺麗に培養細胞をギムザで染める際のコツはありますでしょうか？ またメタノール固定前の乾燥の是非はどうなんでしょう？ 教えてください。
- mendels
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- sevenless
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固定前にはＰＢＳで一度リンスしています。
- sevenless
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Wako のギムザ液を使って添付のプロトコール通りやってますが、特に問題ないですよ。 http://www.wako-chem.co.jp/siyaku/info/life/article/giemsa.htm 主要な違いとしては、 メタノール固定後乾燥しない ギムザ液は水で希釈 染色は室温 といった点でしょうか。 色々な条件を試したわけではないので、これらの違いがどの程度影響するかは分かりません。
お礼
早速ありがとうございます。 水で希釈した場合と、室温で染色というのは何度か試みたんですが、 固定後すぐギムザというのはやっていませんでした。 固定前の洗浄段階ではいかがでしょう？
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