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※ ChatGPTを利用し、要約された質問です(原文:Digetionが上手くいかなくなりました)

Digestionが上手くいかなくなりました

umeruの回答

  • umeru
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回答No.2

自信はあまりないのですが、 DNA量に対して酵素量が多いときは(今回はタンパク質としてBSAも入ってるみたいですし)、DNAにタンパク質が結合して電気泳動の時に、流れないことがよくあります。 ウェルの中にDNAが溜まったままで、UVあてたらウェルが光るような場合や、なんで??って思うようなスメアなバンドがでることがあります。 そういった症状であれば、あらかじめLoading Dyeの中に、終濃度0.01%になるようにSDSを入れておきます。そうすると、DNAとタンパク質が解離してきれいなバンドがでます。 他のDNAをXhoIで切ったらうまくいくということなので、私の仮説はあてはまらないのかもしれません。

loves_beyonce
質問者

補足

そうなんです!!おっしゃるとおりで、、最近なのですが、バンドが見えない代わりにスメアがでたり、ウェル中にぜったい光るものがあるんです!マーカーのウェルにはいつも、何も見えないのにサンプルのウェルにだけ絶対何か、光るものが混在してるんです! ゲルの保存状態が悪く何かコンタミしているのか、ゲル自体がおかしいのかと迷いまくってたのですが・・・、0.5μgのDNAをtotal50μlの反応液に対して20Uじゃ多すぎですよね?  あと、なぜ多すぎるとDNAにタンパクがくっ付くのでしょうか? 質問ばかりですいませんが、よろしくお願いします

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