- 締切済み
バンドの濃さから求めるＤＮＡの量
- みんなの回答 （2）
- 専門家の回答
みんなの回答
- atyushi
- ベストアンサー率50% (5/10)
λDNAは48.43kBp これが0.62μg (0.31μg/μlが2μl)ある。 それぞれのバンドの大きさを合計すると48.43kBpになる それぞれのバンドのDNA量を合計すると0.62μlになる あとは割合。
基本的には「分子量が判っているマーカーと一緒に流して、バンドの濃さの比較から検体のDNA量を推測する」ということだと思います。 シークエンスを外注するとき、この方法でサンプルDNA量を発注書に記入して泳動写真も送っていました。 参考ＵＲＬに、その方法が詳しく記述されています。
お礼
ＵＲＬまで載せていただきありがとうございました
関連するQ&A
- 電気泳動によりDNAの分子量を求める方法。
先日、実験でDNAの電気泳動を行いました。 それで、電気泳動の結果からDNAの分子量を求めなくてはならないのですが、いまいちよく分かりません。 電気泳動をしたのは標準マーカーと制限酵素処理する前のDNA、した後のDNAです。 標準マーカーはバンドが23、9.5、6.5、2.3、2.0に現れました。 制限酵素処理前のDNAはバンドが9.5に現れました。（した後については事情により省略させてください。）また、単位はKbpです。 自分でも考えてみたのですが、DNAの長さが分かっただけで分子量がどのように得られるのかさっぱり分かりません。 この結果からどのように分子量を求めていけばよいのでしょうか？ どなたかご教授願えませんでしょうか。よろしくお願いいたします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 制限酵素によるプラスミドの切断
生物学の実験で、制限酵素によるプラスミドの切断の実験を行いました。制限酵素で二重鎖DNAを切断し、生じたDNA断片をアガロースゲル電気泳動により分離するという方法です。 コントロール・・・・（プラスミド 蒸留水 High Salt Buffer Medium Salt Buffer) サンプル・・・（コントロールにEcoRI HindIIIの制限酵素を加えたもの）の２つをそれぞれをゲルに流し込み。電気泳動を行いました。 電気泳動後、ゲルの写真を見たのですが C ｜ ｜ S ｜｜｜ － →泳動方向→ ＋ というような結果が出ました。 サンプルとコントロールのバンドの距離が同じ長さなので、切断されていないと先生が言いました。ここから質問なのですが、 切断されていないということは、サンプルのレーンのバンドの数は０本ということですか？ また、なぜ切断されなかったのか教えてください（制限酵素によってDNAが切断されたのなら、そのDNAにはその制限酵素の認識配列が含まれいたということですよね。私たちの班のDNAには認識配列が含まれていなかったことになるのでしょうか？）
- 締切済み
- 生物学
- 「制限酵素によるDNAの完全な切断」の定義をおしえて下さい。
1) 制限酵素認識領域を含むDNAをPCRで増幅 ↓ 2) DNAを精製 ↓ 3) 制限酵素処理 ↓ 4) DNAを精製 ↓ 5) 4)をテンプレートとして1)と同じプライマーセットでPCR ↓ 6) 1),3),5)のサンプルを電気泳動でチェック というような行程で実験を行ったのですが、5)で1)と同様のバンドが検出されました。 これは、3)でDNAが完全に切断されていないということだと思うのですが、制限酵素の取説通りの「制限酵素によるDNAの完全な切断」を行うための操作しっかりと行ったはずです。 どなたか「制限酵素によるDNAの完全な切断」の定義をおしえて下さい。 よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 至急にお願いいたします
プラスミドDNAの調整と制限地図の作製の実験をしました。 制限酵素であるHindIII、BamHIで切断されたプラスミドDNAと制限酵素未処理のプラスミドDNAのアガロースゲル電 気泳動を行いました。 しかし、制限酵素処理したプラスミドの制限地図を作る際に、白く光っているバンドを採用して、2点目（最初に出てきた白いバンドの後）に出てくるバンド（薄い灰色）は抜いて作製するように言われました。 これはなぜですか？ 教えて下さい また、電気永動するにあたってどうして未処理のプラスミドと処理のプラスミドを利用したのかについても教えて下さい
- ベストアンサー
- 生物学
- 至急にお願いいたします
至急にお願いいたします プラスミドDNAの調整と制限地図の作製の実験をしました。 制限酵素であるHindIII、BamHIで切断されたプラスミドDNAと制限酵素未処理のプラスミドDNAのアガロースゲル電 気泳動を行いました。 しかし、制限酵素処理したプラスミドの制限地図を作る際に、白く光っているバンドを採用して、2点目（最初に出てきた白いバンドの後）に出てくるバンド（薄い灰色）は抜いて作製するように言われました。丸く囲ってるところです これはなぜですか？ 教えて下さい また、電気永動するにあたってどうして未処理のプラスミドと処理のプラスミドを利用したのかについても教えて下さい
- ベストアンサー
- 生物学
- 今度は・・制限酵素の失活についてなんですが。。。
毎回毎回すみません・・また実験がうまくいきませんでした・・・ プラスミドＤＮＡをEcoRI,BamHIの二種類の制限酵素を使用し、どのように切断されるかをアガロース電気泳動を行って、バンドの移動度を比べてみました。 １つは、EcoRIだけで切断し、もう１つは二種類の酵素で切断しました。 でも電気泳動ででたバンドはネガコンとして流した未処理プラスミドＤＮＡと同じバンドでした。通常移動度が遅くなったり、バンドが２本でるはずなのですが・・まったくありませんでした・・・ 制限酵素が失活して、切断できなかったのではないかと考察したのですが・・・酵素は熱を加えると失活してしまうため温めないように注意したのですが・・ 制限酵素が失活してしまう要因をどうか教えてください。実験で注意すべき点など教えていただければ今後の実験に役立ちます。ぜひ実験をして経験された事でもよいので教えてください。いつもいつも実験の失敗についてばかり質問してしまってすみません・・・ よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- プラスミドDNAの制限酵素による切断
プラスミドDNAを2種類の制限酵素（EcoRI）によって切断し、それをアガロース電気泳動法でDNA断片を長さによって分離する。という実験をやったのですが、失敗して結果と考察がわかりませんでした。教えてください。よろしくお願いします。
- 締切済み
- 生物学
- DNAアガロースの電気泳動
研究室に配属されたばかりの３年生なんですが、ショウジョウバエの幼虫からDNAを抽出し、PCRを用いてそれを増幅させ、電気泳動で、DNAが増幅されているかどうかを確認する実験をしました。 サンプルマーカーには、λ/HindIII（2.3、9.4、6.6、 4.4、 2.3、 2.0）を用いました。 電気泳動の結果は、2.3と2.0のバンドがしっかりと見え、その下にもいくつか不要なバンドが見えていました。 この結果から、遺伝子（DNA）の構造を考えたいのですが、どのように考えたらいいかアドバイスがあれば教えてください(>_<)お願いしますm(__)m
- 締切済み
- 生物学
- アガロース電気泳動に関する質問です
現在大学の研究室で遺伝子の切り貼りの操作を行っています。 制限酵素で2箇所切断し、ベクターとインサートをゲルカットにより分離したく、アガロース電気泳動で30μL流しました。すると、ベクターのバンドがうまく出ませんでした・・・。制限酵素処理の問題ではなく、ゲル・電気泳動での問題だと思うのですが、原因がわかる方がいらっしゃったら回答よろしくお願いいたします。 ちなみに、同じもの（制限酵素処理したもの）を3μLで流したときはきれいなバンドが出ました。DNA量が多いことも原因のひとつとして考えられるのでしょうか？
- 締切済み
- 科学
- 制限酵素切断地図について
３種類の制限酵素で切断したある未知ＤＮＡを電気泳動させた後、ＤＮＡバンド写真からそのＤＮＡの制限酵素切断地図をどのようにして作ればよいのかわかりません。地図（線）上にどのように切断部位を並べていけばいいのか教えてください。
- ベストアンサー
- 生物学
お礼
なんか判ったような気がします ありがとうございました