- 締切済み
ペプチド成分の抽出
細胞・組織抽出液から ペプチド(500-10,000 Da程度）成分のみを得て実験に用いる計画を立てています。 サンプルの組成としてはタンパク・ペプチド・リン酸塩・アミン・脂質・糖などが考えられます。電解質などは逆相クロマトで簡単に除去できると思うのですが、糖・脂質の除去でいい方法がないかと悩んでいます。 （脂質はヘキサン抽出が使えそうですが収率がかなり悪いようなので躊躇しています） 現在の環境では逆相クロマト（c18カラム等）、 分子量でカットするフィルター(10k,50k等)、あとは一般的な生化学研究実験室相当の環境があります。生体組織、サンプルからペプチド性物質のみを比較的簡単に且つ効率よく抽出する方法はどのようなものがあるでしょうか？ 特にペプチドと糖の分離についていい方法がありましたらアドバイスお願いします。
- kskayakawa
- お礼率80% (8/10)
- 生物学
- 回答数1
- ありがとう数1
- みんなの回答 （1）
- 専門家の回答
みんなの回答
- stringf35
- ベストアンサー率66% (69/104)
アイデアのみで申し訳ないですが… 脱脂であればアセトンなんかは使えそうかと思ったんですが、 目的分子量が500-10,000 Daとなると沈澱しないかもしれないですね。 クロロホルムも脂質をよく溶かしますが、蛋白との分離には どうでしょう。 なんかの勾配遠心とかでさくっと分けれると楽なんですけどね。 徒然なるままに書いてしまってすみません…
関連するQ&A
- RNA抽出を行うのですが
マウス組織からのRNA抽出なんですが実験方法で悩むところがありますので教えてください。 今回利用しようとする組織がE7.5,E6.5,E5.5の各時期における胎児を親から取り出し、胚葉分化の違いを調べるためにリアルタイムをする予定なんですが 組織があまりに微量過ぎて、乳鉢ですりつぶすなどの操作をした場合、目視が出来なくなりサンプルをロストしそうで、何か他の方法が無いかを考えているのですが、胎児からRNAを抽出する実験を行った経験がある方がいましたら、教えてください。 お願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 固相ペプチド合成のBoc基除去後の中和に、TEAを用いるのはよくないのは何故？
いつもお世話になります。ややマニアックな質問になってしまうのですが……。 実際にペプチドの固相合成をやっているわけではありませんが、ポリスチレンを用いて似たようなことをやっているので、固相ペプチド合成の手法をよく参考にしています。 「第４版 実験化学講座」の「ペプチド結合の形成と保護基の除去」（P290）では、Boc基を除去して洗浄した後の中和において、DIEA（ジイソプロピルエチルアミン）の利用を推奨しています。 研究室にTEA（トリエチルアミン）があったので代用できるかなと思ったのですが、脚注に「TEAの使用は避けた方が良い」とあります。 求核性の違いぐらいしか差がないように思うのですが、何か他に、TEAに決定的な欠点があるのでしょうか？ また、「実験化学講座」以外で、一般的な固相有機合成に関する文献などをご存知でしたら教えて下さい。 随分と初歩的な質問かもしれませんが、よろしくお願い致します。
- 締切済み
- 化学
- ヘキサン抽出では抽出できない懸濁物抽出にはソックスレー抽出法で
お世話になります。 今公害防止管理者の勉強をしています その中で水中の油分を抽出する方法で ヘキサン抽出法というのがあります。 そのヘキサン法では抽出困難は懸濁物が入った サンプルはソックスレー法でとありましたが、 教科書にはこのソックスレー法については 記載が無くどんな事をするのがわかりません。 簡単な説明ので結構ですのでご存知の方 製品情報以外によいＨＰがありましたら 教えてください。 ちなみに以下のＨＰがありましたが どちらが優れているのかしか分からず… よろしくお願い致します。 http://www.pref.aichi.jp/kankyo-c/research/27/27sum9.html
- ベストアンサー
- 環境学・生態学
- RNAの抽出について
今大学でtotal RNAの抽出を行っているのですが、糖類が多く含まれ抽出液が粘液状になってしまいます。 KITは用いていません。何か糖を除去するのにいい方法はありませんか？ 塩化リチウムを使ってみたのですがあまり効果はえられませんでした。 超遠心は用いていません。 よかったら教えてください。 （超遠心はあります、よければKITを用いない方法で）
- 締切済み
- 生物学
- 逆相クロマトHPLC前のサンプル処理
生化学、分子生物学の分野でタンパク・ペプチドのHPLCを用いた精製の研究論文を読むと、サンプルをメインの逆相クロマト（nano-LC c18等）のHPLCにかける前に、使い捨てカートリッジ式の固相クロマトでサンプル処理している記述がよく見られます。 使い捨てカートリッジは最近だとSep-Pak c18, OASIS HLB等が多いようで、これらはサンプルの脱塩のが主な理由のような記述をみます。 疑問なのは本番の逆相クロマトでも同様の脱塩が期待できるのにもかからわず、なぜ前処理が必要なのか？ということです。 サンプルに過剰量の塩が存在すると逆相クロマトの分離能などに影響を及ぼしたりするのでしょうか？
- 締切済み
- 生物学
- エタノール抽出について
たぶんかなり基本的な質問になってしまいますが、教えていただきますでしょうか。 私は、果物からエタノールで抽出をし、エバポレーターで濃縮したエキスを蒸留水に溶解して実験動物に与えて糖負荷試験を行い、血糖が降下するかを見る実験を行おうとしているのですが、その際用いるエタノールを、 ・100％エタノール ・70％などの含水エタノール のどちらにするのかがわからなくなっております。 一応、この実験をするにあたりモデルとなった実験（サンプルが果物ではなく、月見草の種子を使った同様の実験）では、70％エタノールを用いているのですが、これは種子の糖質含量が少ない為、より糖質を抽出する為だと思われます。 一方、私の実験の場合元々糖質含量の多い果物を用いるので、100％エタノールの方が糖質をあまり抽出しないので、良いような気がします。 ただこの場合、私が100％と含水の違いを「糖質をも抽出するか」という点でしか理解出来ていない為、思ったことなのです。 どなたか食品化学・農学に詳しい方、この２種類のエタノール抽出の違いについて、またこのような抽出について詳しく記載されている書物などがあれば教えていただけますでしょうか。 知識が乏しくて申し訳ありません。 どうぞ宜しくお願い致します。
- ベストアンサー
- 農学
- 溶液がにごる原因を教えてください。
前回の質問と関連した質問です。有機溶媒（ヘキサンや酢酸エチル）で抽出した抽出物をジメチルスルホキシドに溶かしました。そのサンプルを用いて実験を行ったのですが、サンプルを添加した際、溶液が白くにごってしまいました。まったく同じサンプルを用いた場合でも白くにごる場合とにごらずに透明な場合があります。サンプルは同じで溶かしている溶媒も同じなのに溶液が白くにごるのは何が原因なのでしょうか？
- 締切済み
- 化学
- Rf値について
実験でシリカゲルのTLCをしました。サンプルはメタニトロベンズアルデヒドとベンズアルデヒドで、展開溶媒は酢酸エチル：ヘキサンが２：８のものと３：７の二つです。その結果、酢酸エチル：ヘキサン＝２：８で展開したほうがrf値が小さくなったのですが、なぜそうなるのかわかりません。その理由を教えていただけないでしょうか。 また、このサイトを調べてみると、「一般的に吸着分配クロマトでは、展開溶媒の極性を上げると試料の吸着が抑制されるので、Rf値は増加する」とあったのですが、これは正しいのでしょうか。正しいとすれば、なぜそういえるのでしょうか。展開するサンプルの極性によってシリカゲルへの吸着力は変わると思うので、一概にそうとはいえないのでは？と思ったのですが、良くわかりません。 一度にいろいろと質問して申し訳ありませんが、もしよろしければ、回答よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 化学
お礼
クロロホルムについては思いつきませんでした。 調べてみます。 ありがとうございました。