• 締切済み

プラスミドDNA ゲル電気泳動　検量線について

プラスミドＤＮＡを制限酵素で切断したのち、アガロースゲル電気泳動を行い、ＤＮＡ断片から元のプラスミドＤＮＡの全長を求める実験を行いました。そのとき、サイズマーカーＤＮＡの検量線（横軸：移動度、縦軸：塩基対数）を作成したのですが、検量線の両端が直線ではなく曲線になってしまうのはなぜでしょうか？

みんなの回答

  • tanuki81
  • ベストアンサー率11% (1/9)
回答No.1

単純にDNAの長さと移動度は比例の関係ではありません。これは教科書やネット上で移動度からDNAの長さを計算する式を探して確認してみてください。結構簡単に見つかるはずです。

  1. カテゴリ
  2. 学問・教育
  3. 自然科学
  4. 生物学

関連するQ&A

  • 電気泳動写真からの濃度の求め方

    DNA断片を1%アガロースゲルで泳動しました。EtBr染色し泳動写真からMarkerとの比較でDNA断片の大まかな濃度が求める方法を教えてください。Marker2を2マイクロリトッル使用。

  • 電気泳動について

    アガロースゲル電気泳動の実験を行ったのですが、 形態の異なるプラスミドDNAは塩基数・分子量が等しいにもかかわらず移動距離に違いがでるのはなぜですか？ 分子の大きさが関わってるとか考えてるんですけど、全くわかりません。教えてください。

  • アガロースゲル電気泳動で・・・

    アガロースゲル電気泳動で、DNA断片をマーカーにしてRNAの大きさを測定できますか？ また、理由も知りたいです。

  • プラスミドの電気泳動

    DNAがライゲーションされたプラスミドを大腸菌から抽出して電気泳動したのですが、酵素処理をしていないにも関わらず複数のバンドが表れました。特にプラスミドの大きさを超える大きなバンドが確認されましたが、これはなぜでしょうか？ プラスミドがダイマーを形成しているからとも聞きますが、プラスミドは結合方法も含めてどのように倍数化するのですか？ 又、プラスミドが何倍体になるかは決まっているのですか？ダイマーではなく、トリマーやテトラマーにはならないのでしょうか？ 教えてください。よろしくお願いします。

  • DNAの電気泳動について

    DNAを制限酵素で断片化して電気泳動したときに なぜフラグメントDNAの短いほうが速く移動して、長いほうが遅く移動するかを知りたいです。 教えてください。お願いします。

  • RNAの電気泳動について質問です。

    現在、テンプレートのDNA（長さは197bpです。）からT7ポリメラーゼ酵素を用いてRNAを合成し、精製したRNAの長さを電気泳動によって確認するという作業を行っているのですが、予測される目的RNAの長さは132塩基なのですが、実際のバンドは250塩基付近の辺りに単一バンドが出ました。RNAがヘアピン構造を取ると、自身の長さのバンドよりも早く流れるというのは経験済みですが、大きくなったのは始めてです。これは精製したRNA同士で多量体を形成しているおそれがあるという解釈でよろしいのでしょうか？ また、ウチの研究施設には、RNA用のマーカーや試薬がないために、DNAと同様に1×TAEバッファーでアガロースゲルの電気泳動を行いました。マーカーもDNA用のものを用いているので、あまりマーカーは当てにしなくてもいいのでしょうか？ あと、RNAを泳動する際に、1本鎖で流れるようにするテクニックとかありますか？これまでは、RNAを泳動前に95℃で10分ほど熱を加えてから泳動を行っていました。 ヒントでもいいので、ご教授お願いします。

  • プラスミドDNAの制限酵素による切断

    プラスミドDNAを2種類の制限酵素（EcoRI）によって切断し、それをアガロース電気泳動法でDNA断片を長さによって分離する。という実験をやったのですが、失敗して結果と考察がわかりませんでした。教えてください。よろしくお願いします。

  • 制限酵素によるプラスミドの切断

    生物学の実験で、制限酵素によるプラスミドの切断の実験を行いました。制限酵素で二重鎖DNAを切断し、生じたDNA断片をアガロースゲル電気泳動により分離するという方法です。 コントロール・・・・（プラスミド　蒸留水　High Salt Buffer Medium Salt Buffer) サンプル・・・（コントロールにEcoRI　HindIIIの制限酵素を加えたもの）の２つをそれぞれをゲルに流し込み。電気泳動を行いました。 電気泳動後、ゲルの写真を見たのですが C　 ｜ ｜ 　　 S ｜｜｜ 　 －　→泳動方向→　　　　　＋ というような結果が出ました。　 サンプルとコントロールのバンドの距離が同じ長さなので、切断されていないと先生が言いました。ここから質問なのですが、 切断されていないということは、サンプルのレーンのバンドの数は０本ということですか？ また、なぜ切断されなかったのか教えてください（制限酵素によってDNAが切断されたのなら、そのDNAにはその制限酵素の認識配列が含まれいたということですよね。私たちの班のDNAには認識配列が含まれていなかったことになるのでしょうか？）

  • プラスミドDNAの精製

    シークエンス反応に使うプラスミドDNAを抽出したのですが、反応が十分に行かないのか、塩基配列をあまり読むことができません。サンプルのプラスミドDNAの純度に問題があるような気がするのですが、純度がよいDNAを抽出する方法を(経験)コツなどを含めてご教授願えますでしょうか。 プラスミドDNAは大腸菌から抽出します。シークエンス反応はサイクルシークエンス法です。泳動はアクリルアミドゲルで行っております。

  • アガロース電気泳動

    質問です 制限酵素（ヒンディースリー）:0.5μl 制限酵素の反応用緩衝液 :1μl 水 臭化エチジュウム　TAE緩衝液（Tris-HCL、酢酸、EDTA） 分子量マーカー、ローディング緩衝液 プラスミド アガロースゲルを使った電気泳動にてＤＮＡの切断を確認する実験を行い、結果は3.0ｋｂのところにバンドが出ました。 この情報だけで何かわかることはありますか？ 色々なサイトで検索してみたのですが自分の力不足で答えにたどり着くことができませんでした。お力をお貸しいただければ幸いです。

注目のQ&A

カテゴリ

専門家に質問してみよう

職業から探して質問する

あなたにピッタリな商品が見つかる！ OKWAVEセレクト

質問する