- ベストアンサー
大腸菌の発現
- みんなの回答 (1)
- 専門家の回答
質問者が選んだベストアンサー
vector immunoscreeningという方法ですか? 何かの論文に載っていたのでしょうか? もしそうだとすると前後の文章で判断できると思いますので、 補足願います。 単純に考えると。。。 大腸菌の発現系を用いてあるタンパク質を発現させるときに、 目的のタンパク質がきちんと発現している大腸菌を、 目的のタンパク質を抗原として作製した抗体を使って、 スクリーニングする方法だと思いますが。。。 自信なしです。 分かりづらい文章ですみません。
関連するQ&A
- 大腸菌でタンパク質の発現
大腸菌でタンパク質の発現させたのですが、すべて不溶性画分に発現していて、リコンビナント酵素を得ることが出来ません。これまでIPTG濃度、培養時間、コンピテントセル、ベクター等検討しましたが、だめでした。どうしたら発現しますか?pET3aで発現しなかったため、今ベクターはpColdベクターです。
- ベストアンサー
- 生物学
- 大腸菌でのタンパク発現の封入体
大腸菌でのタンパク質発現について質問です。大腸菌でタンパク質を過剰発現させた場合、 タンパク質が封入体に蓄積されることがよくありますが、原因はフォールディングが追い付かない、も しくは原核生物だから真核生物のタンパク質を正常にフォールディングできないからでしょうか? この回避方法として、真核生物である酵母でタンパク質を産生させると思うのですが。 また、疎水性タンパク質が封入体を作りやすいのは、疎水性相互作用による凝集するからでしょう か?
- ベストアンサー
- 生物学
- 今、pColdベクターを用いて大腸菌でのタンパク発現を行っています。
今、pColdベクターを用いて大腸菌でのタンパク発現を行っています。 37℃から15℃に温度を下げる際、15℃以下に下げた方がよいのでしょうか。 それとも15℃に下がったらそれで良いのでしょうか。 私は今までいったん10℃前後まで下げて行っていたのですが、結構時間がかかるので、15℃になっていればそれで良いのなら、あまり温度を下げない方向で進めようかと思っているのですが。 どなたかご教授願います。
- ベストアンサー
- 生物学
- タンパク質の大腸菌での発現。
26kdaのリコンビナントタンパク質とその変異体を得るために大腸菌での発現を行っているのですが、野生型のタンパク質は培養し菌体回収後、超音波破砕処理した時可溶性、不溶性画分がそれぞれ半分ずつぐらい出るのですが、変異体ではすべてが不溶性に発現するためrefoldingを行おうと思っています。その条件検討のために野生型不溶性画分を何回も超音波破砕処理し、SDS-PAGEで単一なバンドを得たいのですが、なかなか単一になりません。超音波破砕処理以外の方法があるのでしょうか?よろしくお願いします。
- 締切済み
- 生物学
- 大腸菌にタンパクを作らせる
大腸菌に、あるタンパク質(cDNAは手元にある)を作らせたいのですが、どうやったらいいですか? 先生は「Ca溶液の中で大腸菌を洗って、氷の上において、それからああしてこうして、42℃におく」とかおっしゃってたのですが、これはDNAをどうやって組み込んでいるのでしょう? また、たくさん発現させるには、どうしたらいいですか?
- ベストアンサー
- 生物学
- 大腸菌培養の液体培地
大腸菌で目的タンパク質を発現させる時の液体培地ですが、LB培地のほかに何がありますか?プロトコルに選択培地と書いてあるのですが、やっぱり培地はベクターやコンピテントセルの種類などで変えたほうがいいのでしょうか。
- ベストアンサー
- 生物学
- 大腸菌内での遺伝子発現について
2つ教えていただきたいことがあります。 質問1.プラスミド(pUCやpBR322など)のMCSに複数の遺伝子を別々の制限酵素サイトで入れた場合、大腸菌の中で別々のタンパクとして発現されるのでしょうか? たとえば、ベータガラクトシダーゼの遺伝子とカナマイシン耐性遺伝子をMCSに入れても、両方とも機能するのでしょうか? 質問2.プラスミド(pUCやpBR322など)にハイグロマイシン耐性遺伝子を付け加えたいのですが、PCRでハイグロマイシン耐性遺伝子のORFを増やしてpUCやpBR322などのMCSあるいは、プラスミドバックボーンのどこか(丁度使いやすい制限酵素サイトがある場所など)に組み込むことで大腸菌内で機能しますでしょうか? よろしくお願いいたします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 大腸菌のグリセロールストック
大腸菌のグリセロールストック 大腸菌をグリセロールストックするとき、マニュアルにはOD600=0.6~0.8と書いてありましたが、培養しすぎて1.2になってしまいました。ちなみにタンパク質を発現させるための大腸菌です。 別にOD600=1.2で作っても問題はないですか?それとも作り直した方がよいでしょうか?
- ベストアンサー
- 生物学
お礼
参考になりました、ありがとうございます。