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蛍光検出
現在カフェインをfura-2と言う蛍光試薬を用いて蛍光検出しようとしています。蛍光強度はカフェイン濃度に依存するかを確認することが目的です。 そこで、緩衝液としてリン酸ナトリウムを用いて蛍光検出を行ったところ、カフェイン濃度が上がるにつれて、蛍光強度は低下しました。しかし、緩衝液としてリン酸ナトリウム+EGTAとすると、カフェイン濃度が上がるにつれて、蛍光強度は上昇し、蛍光強度がカフェイン濃度に依存することが確認できました。 なぜEGTAを添加するだけで、リン酸ナトリウム緩衝液の場合の結果と逆の結果になったのでしょうか??
- fishdepape
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- lialhyd
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これはvitroでのアッセイですか? それとも細胞か何かを使ったアッセイですか? 基本的にfura-2もEGTAもCa2+のキレート剤として働きますから、そのあたりが原因だと思いますよ。 ちょっとアッセイシステムがよくわからないので、これ以上は詳しくわかりませんが…。
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補足
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