アセトン沈澱のいろいろ

質問

ＣＳＦ（脳脊髄液）をアセトン沈澱させようと調べると

　(1)サンプル＋サンプルの100倍量のアセトンを
　　ON ICEで30分、その後遠心30分（4℃12000rpm）

　(2)サンプル＋サンプル3倍量の冷アセトンを
　　-20℃で2時間インキュベート後、遠心5分（1000rpm)

　など方法がいろいろで、どれが最適かわかりません。

　予想するに、遠心を長時間使えない状態だったり
　電気代を考えると(2)が良いのでしょうか。

　A :目的タンパクによると思いますが
　いったい何がどう最適かは、そのタンパクによるんでしょうか？

　B:それぞれの条件をかえてどれが回収率が最適か
　自分で検討するしかないのでしょうか？

　C:アセトンを加える量にこんなに差があっていいんでしょうか？
　（１：１００と１：３というのは・・・）

回答No.1

kgu-2 · ベストアンサー

>予想するに、遠心を長時間使えない状態だったり電気代を考えると(2)が良いのでしょうか。
遠心機を30分使えないとか、その程度の電気代をケチらないといけないのなら、実験にはなりません。考えすぎです。

A タンパクの場合、熱に不安定なものが多いので、低音は常識。私が学生時代は、氷で冷やしておく程度でしたが、今では-20℃も難しくはないハズ。

B 氷で冷やす程度で良いか否かは、回収率で判断すべき。遠心も、1000rpmでは、落ちない気がしますが、これもタンパク次第。私の場合は、静置程度でOKでしたが。

C 100gのサンプルに100倍加えると、10リットルになり、遠心が大変。1mgのサンプルに10倍では0.01mlにしかならず、沈澱の有無は見えないでしょう。添加量は、常識での判断。