細胞培養がうまくいきません。

質問

接着性の細胞を液体培地で培養していますが、コンタミして困っています。
培養液には、抗生物質、抗真菌剤を加え、実験で使う器具はＵＶ照射して使用しています。
培養容器は、フラスコです。インキュベーター内では、キャップを緩めて細胞が呼吸できるようにしています。
インキュベーターの湿度を保つために滅菌蒸留水を入れ、ＳＤＳを加えています。
ここで、ふと疑問なんですが、インキュベーター内でキャップを緩めなくてはならない場合は、アルコール消毒してからインキュベーターに入れたらよいのでしょうか？しなくてもよいのでしょうか？
現在は、インキュベーター内にフラスコを入れる際に、70％エタノールを吹き付けて入れているんですが、これだと、カビが生えてしまいます。（フラスコの外側に）

回答No.4

noporih · ベストアンサー

まず下でfujishiroさんがおっしゃっている通り、培養液がコンタミしていないかを調べてみるべきだと思われます。冷蔵庫に入れてあると菌が繁殖しづらく、確認しづらいので、一日、室温に置いておきます。翌日、ビンを振ってみて白いものがユラユラとしていたらコンタミってことになります。

僕は使用する器具・試薬はすべて乾熱滅菌・オートクレーブ・ろ過滅菌を行っています。そして、たとえエタノール消毒していたとしても「手が触ったところは菌が付いている」と思ってそれらを使用しています。
あと以外と気が付かないところが原因だったりします。例えば誰かがピペット操作のときにニップルまで培養液を吸い上げてしまったのに、それに気づかず放置。後の人がそれを使ってコンタミだらけ・・・なんてこともあると聞きます。

あと、インキュベートについてですが、基本的に外側を消毒しなくても中身は平気です。70％エタノールを吹きつけてカビが生えるということはインキュベーター内の環境がよくないのではないでしょうか？一度、チェックしてみて、必要があれば掃除・滅菌をした方がいいでしょう。他の実験者の方（操作に慣れている方）のディッシュにも同じことが起こっているのでしょうか？

ちなみに失礼ですがkumanokophooさんは培養を始めて間もなかったリするでしょうか？始めのうちは気をつけているつもりでも、どうしてもコンタミの洗礼を受けてしまいます。でもしばらくすると慣れてきて失敗しなくなりますよ。

お礼

回答ありがとうございます。

＞冷蔵庫に入れてあると菌が繁殖しづらく、確認しづらいので、一日、室温に置いておきます。翌日、ビンを振ってみて白いものがユラユラとしていたらコンタミってことになります。

なるほど・・・。こうすればコンタミしているかわかるんですね。
さっそく培養液を外に出してみます。

＞ピペット操作のときにニップルまで培養液を吸い上げてしまったのに、それに気づかず放置。後の人がそれを使ってコンタミだらけ・・・

これ、あるかもしれないです。フィルターを取り替えないといけないですね。

細胞培養は今回が初めてです。コンタミはつきものだと言われるんですが、こうもコンタミばかりさせていると、だんだんと肩身も狭くなり・・・と最近では培養をしたくないとまで思ってしまいます。

もう一度、徹底的な掃除から始めて、１つ１つの操作に注意を払って気をつけながら培養をしてみようと思います。

ありがとうございました。