• ベストアンサー

生きた細胞の観察

生きた細胞を観察したい場合、どんな顕微鏡を使うのがいいのか悩んでいます。 具体的には、細胞膜の破裂を観察したいです。 生細胞の観察は、基本的には光学顕微鏡で蛍光観察だという事は分かっているのですが、明視野、暗視野、位相差、偏光、微分干渉などでも可能なのでしょうか？ ご意見よろしくお願いします。

  • 化学
  • 回答数1
  • ありがとう数2

質問者が選んだベストアンサー

  • ベストアンサー
回答No.1

生物カテゴリーで聞いた方がよかったですね。 生細胞の観察には微分干渉がベストではないでしょうか。 生細胞の観察はもちろん無固定で、基本的に無染色であり、切片、乾燥標本や押しつぶし標本とちがい厚みがあるので（培養皿上の培養液中で観察する場合は特に）微分干渉が適しています。 無染色の観察には位相差という選択肢もありますが、カバーグラスである程度押しつぶさないとよく見えません。 >生細胞の観察は、基本的には光学顕微鏡で蛍光観察だという事は分かっているのですが そうでもないです。 蛍光観察をするには蛍光色素で染色する必要がありますが無固定では簡単ではありません。たとえばGFPを発現するベクターをトランスフェクションしておくとか、生細胞が染まる特殊な蛍光染色をする必要があります。また、励起光が細胞にダメージを与える危険もあります。

hatachon
質問者

お礼

遅くなりましたが、ありがとうございました。 無事顕微鏡の購入を致しました。

  1. カテゴリ
  2. 学問・教育
  3. 自然科学
  4. 化学

関連するQ&A

  • 細胞の蛍光観察について

    蛍光顕微鏡の使用についてですが、 蛍光免疫染色であれば、抗体の細胞膜透過を促すためにTritonなどで細胞を溶解させることはわかりますが、 CFPとYFPの蛍光観察などはどうなのでしょうか？ 細胞をカバーガラスの上で培養⇒トランスフェクション そのままスライドガラスにのせて観察　とかできるのでしょうか？

  • タマネギの表皮細胞の細胞膜について

    タマネギの表皮細胞で細胞膜を観察できなかったのですが、どうしてですか。（光学顕微鏡　×300)

  • 24ウエルプレートでの培養細胞の観察

    24ウェルプレートで付着性動物細胞を培養し、位相差顕微鏡で観察しております。 ところが、ウエルの中央部と縁では全く細胞の見え方が異なるので困っております。 縁に生えている細胞は形もシャープで、厚みもあり、大きく見えます。 これは、例えば、２４ウェルプレートの縁が接着されていて屈折が違うなど、光学的な問題なのでしょうか？ あるいは実際に中央部と縁では細胞の増殖・形態が変わってくるのでしょうか？ 同じようなご経験をお持ちの方、なにかご存知の方、ご解答お願いいたします。

  • 細胞内カルシウム観察方法

    細胞内にカルシウムイオンが取り込まれているかどうかを蛍光顕微鏡を用いて観察したいのですが、よくわかりません。fura-2/AMを用いようと思っています。励起光を上手く340nmにしたりできるのでしょうか？ 定量性は求めないのですが、、

  • 細胞分裂時における、細胞膜の挙動について

    通常の二次元の培養方法で、細胞分裂時の細胞膜の挙動を光学顕微鏡で観察すると、ボコボコと細かな突起を突き出すのがみられます。繊維芽細胞であってもガン細胞であっても同様な現象がみられるのですが、この突起の意義や生じる仕組みが非常に気になります。

  • 植物のプロトプラストを用いた細胞死検定について。

    現在、植物のプロトプラストに、すでに細胞死を誘導すると分かっている遺伝子を導入し、エバンスブルー染色によりその細胞死の確認を行っています。 今後は細胞死を誘導するであろうと予想される遺伝子を片っ端から導入し、細胞死を観察することでスクリーニングを行おうと思っています。 現時点では、遺伝子が導入された細胞をピンポイントで見つけ、その生死を確認するために同時にGFPを導入し、顕微鏡で観察しようとしています。 しかし、ポジコンの実験においてGFPの蛍光が観察される細胞が少なく、始めは導入効率が悪いのかとも思ったのですが、明視野で確認するとエバンスブルーで染まった細胞がいくつもあったのですが、何度繰り返して確認しても青く染まったプロトプラストにおいてGFPの蛍光が観察できませんでした。 そこで質問なのですが、GFPを導入した細胞をエバンスブルーで染色するとGFPの蛍光は観察できなくなるのですか？（青く染まった細胞は自家蛍光すら見えず蛍光観察下で真っ暗に見えたので） もしくは、GFPが発現していても細胞死が起きると蛍光が観察されなくなるのですか？ 詳しい方いましたら教えてください。 また、プロトプラストの細胞死検定において遺伝子が導入された細胞を的確に見つけ細胞死の有無を確認できる方法があれば教えて下さい。 よろしくお願いします。

  • オオカナダモの細胞

    こないだオオカナダモの細胞を観察したんですけど、普通の光学顕微鏡でその細胞の体積を求めるのは可能なのですか？

  • ＰＩによる死細胞染色での細胞固定の必要性

    お世話になります． 死細胞を蛍光顕微鏡で観察したいと考えています． ＰＩ(propidium iodide)で死細胞を染める場合，細胞の固定は行ったほうが良いのでしょうか？ ＰＩは細胞膜に傷害のある細胞のみを染めるため，死細胞の判別に用いられるらしいですが， 染色前にＰＦＡなどで固定をした場合，生きていた細胞まで染まってしまう気がします． ご解答宜しくお願いします．

  • GFPの細胞の入手について

    私は、蛍光顕微鏡をつかって実験している学生です。 なるべく早くGFPの蛍光を観察したいのですが、 GFPを観察できる細胞を入手する方法を教えていただけないでしょうか。

  • 基本的な質問なのですが、なぜ蛍光観察ってするのですか？

    基本的な質問なのですが、なぜ蛍光観察ってするのですか？ 普通の顕微鏡で細胞を見たりはできないのでしょうか？

注目のQ&A

カテゴリ

専門家に質問してみよう

職業から探して質問する

あなたにピッタリな商品が見つかる！ OKWAVEセレクト

質問する