- ベストアンサー
酵素溶液の保存方法
酵素溶液の保存方法について教えてください。 1.制限酵素のように、50%グリセロールの状態にし、-20℃で良いのでしょうか？ 2.酵素の種類によっては、グリセロールで失活することもあるのでしょうか？ 保存したい酵素はザイモリアーゼです。 よろしくお願いします。
- cerevisiae
- お礼率95% (39/41)
- 生物学
- 回答数2
- ありがとう数1
- みんなの回答 （2）
- 専門家の回答
質問者が選んだベストアンサー
ザイモリアーゼをちょっと手元にある本で調べました。イーストのプロトプラスト調製に使う細胞壁分解酵素のようですね。メーカーのキロンビールに直接聞くのが一番正確で早く正解が得られると思いますよ。
その他の回答 (1)
- cholerae
- ベストアンサー率49% (32/65)
酵素溶液の失活の原因には主に２つあります。１つは変性によって活性中心の構造が変化してしまうため。もうひとつは，細菌のコンタミなどによってたんぱく質そのものが分解してしてしまうため。後者の問題には，質問で触れていないので前者のみに関して回答します。 一般的な方法としては50% glycerol存在下でマイナス20℃でよいでしょう（この条件では凍結していない）。ただし，さらに温度を下げてさらに失活を防ぐ場合と凍結することによって-20℃よりも安定性が悪くなる場合があります。それともうひとつ注意することは，保存液の緩衝液の種類や濃度です。たとえば，リン酸緩衝液などは共晶点（塩と水両方が完全に凍る温度）付近のpHが4付近になるので要注意緩衝液です。凍結速度も変性に関係します。一般には，急速凍結ー緩慢解凍がよいでしょう。 ザイモリアーゼの経験がないので一般的なことを書きました。使用分をエッペンタイプのチューブに分注保存すると思いますが，一度，保存条件にして，１日程度経過したらアッセイしてみて保存前と比べて活性が良好ならば大丈夫でしょう。
関連するQ&A
- 酵素溶液の保存について
いつもお世話になります。 DNAを抽出する際、α-アミラーゼを作用させるのですが、この酵素の保存について悩んでいます。 α-アミラーゼは粉末の状態で購入し、tris-HCl(pH7)に溶解させているのですが、毎回必要量溶解させるには微量過ぎるので10mg/mlでストックソリューションを作っています。 この溶液を冷蔵保存すべきか冷凍にすべきかお教え頂けないでしょうか？ 普通に考えると分注して冷凍ですが、不凍液にしていないので失活しそうで心配です。それにRNaseなどは常温保存できるものもありますし、一般的にどの状態で保存するのがベストなのでしょうか？ 何卒よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 制限酵素の取り扱い
制限酵素を使った実験を行いました。 多くの制限酵素は－20℃で保存されており、チューブに加える時も温度を上げないように注意されました。 しかし、最終的には37℃(酵素の至適温度)で反応させています。 制限酵素を加える時は温度を上げないように注意するのはなぜでしょうか？失活を防ぐためですか？しかし、それなら37℃では失活してしまうようにも思います。 また、次のような操作は可能でしょうか？ (1)チューブにDNA、制限酵素等を全て加えたところで中断して、－20℃で保存する。 (2)反応速度を上げるために、37℃で一時間のところを47℃で30分で行う。 どなたか教えて下さい。お願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 今度は・・制限酵素の失活についてなんですが。。。
毎回毎回すみません・・また実験がうまくいきませんでした・・・ プラスミドＤＮＡをEcoRI,BamHIの二種類の制限酵素を使用し、どのように切断されるかをアガロース電気泳動を行って、バンドの移動度を比べてみました。 １つは、EcoRIだけで切断し、もう１つは二種類の酵素で切断しました。 でも電気泳動ででたバンドはネガコンとして流した未処理プラスミドＤＮＡと同じバンドでした。通常移動度が遅くなったり、バンドが２本でるはずなのですが・・まったくありませんでした・・・ 制限酵素が失活して、切断できなかったのではないかと考察したのですが・・・酵素は熱を加えると失活してしまうため温めないように注意したのですが・・ 制限酵素が失活してしまう要因をどうか教えてください。実験で注意すべき点など教えていただければ今後の実験に役立ちます。ぜひ実験をして経験された事でもよいので教えてください。いつもいつも実験の失敗についてばかり質問してしまってすみません・・・ よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 酵素 失活
酵素には失活という性質があることは分かります。 温度を高くした後に冷やしても酵素が変性して酵素作用は起こらないということは参考書等で良く見かけます。また酵素はＰＨにも大きな影響を受けることも分かります。 ここからが質問なのですが、例えば酵素をカタラーゼとします。ＰＨを酸性またはアルカリ性に変化させ、反応させなくさせた後に中性に戻すと失活してしまいますか?また、カタラーゼを保存するときは品質を保つ為に冷やして保存していますが、極度に低い温度の中保存したら高温の条件にして戻した時と同様に失活しますか?これらの事を参考書を読んで疑問に思ったのですが、高校３年なので勝手に実験できません。どなたか教えてください。宜しくお願いします。
- ベストアンサー
- 化学
- 酵素の摂取方法について
野草の酵素をなるべく良い状態で摂取したいのですが、いろいろな情報により疑問が生じています。分かる範囲で構いませんのご回答をお願い致します。 ■野菜や果物・野草をジュースにしますとジューサーによる熱で酵素の失活がある事やジュースにした後、時間が経過すると聞いた事があります。こちらは本当でしょうか？ ■酵素が残っている状態でジュースにし、即時、家庭用の冷凍庫で冷凍し、後日解凍して飲用した場合、ジュースにした時点より劣るとは思いますがより多くの酵素が残っていると考えても良いでしょうか？ ■酵素は熱に弱いとネットで見かけました。野草を粉末にした場合、酵素は残っているのでしょうか？粉末にする方法は家庭でできる範囲になりまして、日陰で乾燥の後、ミルミキサーで粉砕する手法になります。 ■酵素の働きが強い状態で摂取するおすすめの方法がありましたら教えてください。サプリには頼らず家庭でできる方法を希望しています。 宜しくお願い致します。
- 締切済み
- 生物学
お礼
回答有難うございます。 緩衝液の問題は考えに無かったので、勉強になりました。 choleraeさんのおっしゃる通り、とりあえず試して見ようと思います。