ライゲーションの仕組み

質問

最近分子生物学の勉強を始めましたが、困っています。ライゲーションではベクターと挿入DNAがリン酸結合でライゲーションが成り立つということですが、ベクターを脱リン酸化した場合、挿入DNAの５’末端のPとベクターの３’が結合するのは理解できるのですが、Pのついていない挿入DNAの３’と、Pのついていない脱リン酸化されたベクターの５’がどうやって結合するのでしょうか。
初心者的な質問ですいませんがどなたか教えてください。よろしくお願いします。

回答No.1

geneticist12 · ベストアンサー

脱リン酸された末端はライゲーションされずにnick（ニック、切れ目）として残ります。nickの部分は大腸菌内の修復系で結合されます。

細胞内で複製時に、あるいはいろいろな外的要因でnickは普通に生じ、それは修復系で常に修復されているので、特別な現象ではないです。

お礼

なるほど！わかりました。どうもありがとうございました！

回答No.2

subaru361

1の人に補足です。
DNA２本鎖ですから切断面には５’と３’末端が露出しているような形になります。
脱リン酸化されていない場合は2本鎖がライゲーションによって結合されてますが、リン酸化されている場合は2本鎖のうち片方だけが結合し、片鎖については結合されていないような状態になります。これをnickといってます。いかは1の人の通り。
つまり、ベクターと挿入DNA双方が脱リン酸化されていれば、ライゲーションできません。知っている人には当たり前ですが。この辺はわかっているのでしたらすいません。