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- mimimipanda
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確認ですが、Tritonなどで細胞膜を透過性にしていますよね。 あとは、geneticist12さんがおっしゃている、二次抗体が一次抗体のサブクラスと一致していないことが考えられると思います。
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- geneticist12
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念のため確認しますが、２次抗体がサブクラス特異的になっていますけれど、一次抗体のサブクラスと合っていますか？ 一次抗体がポリクロならサブクラス特異的二次抗体は使わない方がいいです。
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補足
geneticist12さん、bzxjpjpさん、ご指摘ありがとうございます。一次抗体のサブクラスを確認したところ、二次抗体と同じ、anti mouse IgG2aでした。また、Triton-Xを使用しています。