蛋白質のmolについて

質問

参考書に、蛋白質のサクシニル化の方法で、

「蛋白質はアルカリ性溶媒（pH7-9）に分散してから
mol当りで蛋白質中に存在するアミノ基の、１0倍量の
コハク酸を加える」

とあったのですが、蛋白質中に存在する「アミノ基」は
どうしたらわかるのか教えて頂けないでしょうか？

また、アルカリ性溶媒（pH7-9）とは、標準リン酸緩衝液（pH8）でも可能でしょうか？

よろしくお願いします。

回答No.2

c80s3xxx

緩衝液については
ペリン，デンプシー 緩衝液の選択と応用
という本を読むことを強く推奨します．
ページ数はそんなにありませんが，理屈が延々と続く
本ので，うんざりするかもしれませんが，
基本的な理解なしに緩衝液を選択するのは後々の
ためになりません．
現役研究者でもとんでもない緩衝液処方を平然と
「文献どおりだから」とかいって使っているのを
見ると，がっくりくることがあります．

回答No.1

c80s3xxx

逆説的ですが，過剰のコハク酸で反応させたときに
消費されたコハク酸量から求められますね．

まっとうには，アミノ酸分析をおこない，リジン残基の
数を数えることでしょう．

標準リン酸緩衝液では pH 8 ってことはないでしょう．
何もないよりはリン酸塩でもマシですが，本来緩衝液と
しての働きは期待してはいけない pH 領域です．
pH 9 ならホウ酸緩衝液あたりが無難でしょうか．
pH 8 だとアミン系のものでないとよい緩衝剤はないので，
今回の目的には使えません．どうしても 8 でやりたければ，
僕ならホウ酸とリン酸塩の混合緩衝液を使うでしょう．

補足

とても分かりやすい回答をしていただき
ありがとうございます！！

自分の質問に補足なんですが、「標準リン酸緩衝液」
ではなくて、「0.4M NaCl 10mMクエン酸 リン酸緩衝液」
でした…NaOHでpH8.0に調整したものを用いた実験
の続きで、サクシニル化を行うので、この緩衝液で
できるのかな？と思ったのです。
この場合だとどうなんでしょうか？

あまり緩衝液の適切な使い方（どの場合にはどんな
緩衝液がよいか？など）を把握できていなくて、
とても基本的なことを聞いてすいません。