- ベストアンサー
免疫染色について
私はBrdUとマーカーの二重染色をしています。 その際、クエン酸スチーム法いうやり方で、抗原ふかつしているのですが、なぜクエン酸スチーム法がいいのか、利点が分かりません。 分かる方いらっしゃいましたら、教えてください(*_*)
- --MeIchan--
- お礼率42% (9/21)
- 生物学
- 回答数1
- ありがとう数3
- みんなの回答 （1）
- 専門家の回答
質問者が選んだベストアンサー
固定した細胞や組織では、 固定され過ぎて、抗原が露呈されていないようなことが有り得ます。 なので、pHが高いものや低いbufferを使って ふやかす 必要があったりします。 そのbufferとしてクエン酸bufferを用いたりするのです。
関連するQ&A
- エステラーゼ染色について・・・
エステラーゼには特異性エステラーゼと非特異性エステラーゼがあり、染色法は単染色と二重染色があるということは解ったのですが。 白血病のＦＡＢ分類の鑑別時に単染色と二重染色はどのような異なった染まり方をするのでしょうか？又、二重染色があるのに単染色をする必要はあるのでしょうか？どうか教えてください。
- ベストアンサー
- 医療
- サイトカインと免疫染色
口腔粘膜の組織（頬粘膜）を使用して免疫染色（ABC法、DAB・ヘマトキシリンによる対比染色）を行っているのですが、染色結果の理解に悩んでいます。以下内容についてどなたかご教授いただけないでしょうか？ IFN-γを染色すると、一般的に上皮下の浸潤リンパ球が染まります。しかし時々上皮の角化細胞のしかも核に染まっていることがあります。基底層から有棘層にかけて染まっています。これはDABが強すぎるためでしょうか？ サイトカインは細胞から分泌されるタンパクであるため、細胞内の核に染まらないのではと考えるのですが、この考えは正しいですか？ リンパ球のみならず角化細胞も分泌するIL-22や23についても上皮における染色部位がわかる方は教えていただけないでしょうか？
- 締切済み
- 生物学
- 組織(細胞)を染色するとき。
組織(細胞)を染色する際に抗体染色法よりも蛍光染色法のほうが一般的に用いられていると聞いたのですが、それはなぜでしょうか？ 私的にはＡＢＣ法などでは発色の強度を上げることができるので、抗体染色法のほうが良いと思うのですが…
- 締切済み
- 生物学
- 免疫染色実験でに「each run」の業界用語
門外漢が免疫染色実験(ABC法）読み、私訳を試みているのですが、陰性対照試料と陽性対照試料を実験（抗原抗体反応）ごとに含ましめるという意味の記述があります。 「A positive and a negative control were included in each run」 この際の「each run」は「実験１回ごと」、「抗原抗体反応１回ごと」と言う意味だと思うのですが、実際に関係者の皆さんの間では、どのような用語を使用しているのでしょうか。 「triplicateでtestする」が「３系列（またはトリプリケート）で検定する」とは知らなかったほどの素人ですので、このような質問を発する次第です。よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 免疫染色でシグナルが出ない。。
2種類の別の抗原を認識する抗体で、卵巣を凍結して免疫染色を行いましたが、シグナルがみられません。。 －80℃の２－メチルブタノールで凍結後、切片を作製、アセトン固定後免染を行いました。 免染自体は、みな同じプロトコールなので問題ないと思います。 論文を参考に新しく抗体を買った(その論文では製造会社までしか指定がなく、型番までは不明)ので、失活していることはないはずです。 ただ、論文に書いてあった抗体候補は複数あり、違う抗体を買ってしまった可能性もあります。 最初、2次抗体を蛍光のものを用いたのですが、全体が薄く染まり、特異的なシグナルが見られませんでした。 そこで、ABC染色によりビオチンを介したのですが、本来でるはずのところには見られず、細胞がポツポツと卵胞の周りで染まっているだけでした。 抗体濃度は、データシートのスタート濃度でやっています。 この場合、次に何を試してみればいいでしょうか？？ 抗体の賦活化はまだやったことがないので、次やってみようかと思っていますが、今回の結果で特異的に全くでていなかったので望み薄のようですが。。。 シグナルが出ない場合はみなさんはどのようなことを試すのでしょうか？ 何か他に書いた方が答えやすいとのアドバイスもあれば、お願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 免疫染色時の抗体の吸収について
免疫染色に用いる抗体を正常血清で吸収すると良いと言われますが、この際用いる血清は非働化が必要でしょうか？ 培養に用いる血清は必ず非働化していますが、免疫染色では不要にも思うのですが如何なものでしょう？ むしろ非働化しない血清を用いたほうが良いものなのでしょうか？ どなたかご教示ください。
- ベストアンサー
- 生物学
- 免疫染色の固定について
お世話になっています。 免疫染色の際に、２次抗体後washまでは検鏡して細胞が形を保っているのに、その後乾燥させると細胞の形がなくなってしまうのは 固定がきちんとできていないのでしょうか？ 4%パラホルムアルデヒド／PBSは1年ほど前に作成して－20度保存の物を用事溶解して使っているのですが… 心当たりのある方アドバイスお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 免疫染色の方法について（モノクローナル抗体の場合？）
マウスを用いて免疫系関連の研究をしている修士2年です。研究室3年目にして恥ずかしいのですが質問です。 現在、ある内分泌器官を、DABを用いた酵素抗体法（ABC法）で染めて、あるペプチドを産生している細胞の頻度及び分布を調べようと思っています。用意した物とプロトコルは以下です。 ・組織サンプル（ブアン固定→パラフィン包埋→4μm切片） ・Elite ABC kit（内容：Blocking用Goat血清、biotin結合2次抗体、ABC溶液） ・1次抗体（Rabbit anti-（そのペプチド）antibody） プロトコル・・・通常の脱パラ、浸水化、抗原賦活化（一応）、内因性ペロキシダーゼ除去→kitのプロトコル（1次抗体は4℃o/n） この1次抗体は、ある先生に紹介されて知り合った他大のA教授に分与していただいたものです。A教授とは直接お会いしたことはなく、メールや参考文献も自分の指導教官であるB教授を通して受け取っています。A教授はこの1次抗体を自分で作成（既知のアミノ酸配列からペプチドを合成→ウサギに投与→血清から精製）して、その抗体を用いた染色で論文を沢山出しているような方です。その論文を参考にして、今回のプロトコルを組んで染色してみたのですが、全然うまくいきません。組織内の細胞がところどころポツポツ染まるはずなのに、赤血球と血管内皮細胞以外の組織細胞全部がベッタリと染まってしまうのです。A教授の染色で私の染色と異なる点は、動物がラットであること（問題のペプチドは両種で保存されていることが分かっている）、kitを使っていないこと（ABC法ではなくPAP法、発色は同じくDAB）のみです。 こんなことはA教授に聞けばいいのですが、うちのB教授は少々プライドが高いところがあって難しそうなのです。それに、B教授はもともと免疫染色が得意ではないようです。B教授は今のベッタリ染色像が正しい染色像だと思っていて、このまま私の論文まで持っていくつもりみたいですが、色々な参考文献を見ている私としては、このベッタリ具合は絶対何かおかしいのです。（でもB教授は私の意見はお構いなしです(ノд・。) ）だって本当は、下垂体のACTH細胞くらいくっきり染め分けることが出来る抗体なんです。先入観を差し引いても、ラットとマウスでこんなに違うとは到底思えません。 さて、長々と読んでいただいてありがとうございます。。。質問は以下です。 1．私の染色方法やkitで、「もしかしてここのミスかも・・・」と気になる点があったら教えてください。（モノクローナル抗体を使った染色にはもともと不慣れです。） 2．指導教官であるB教授に「待った！」をかけるために、いい策はないでしょうか？？？（この質問に関してはカテ違いかもしれませんが・・・。）
- 締切済み
- 生物学
お礼
そういうことだったんですか！ ありがとうございます＼(^o^)／ お礼が遅くなってしまってすいませんでした。 ありがとうございました☆