- 締切済み
プレートに接着する細胞が、突然接着しなくなり、困っております。。いろ
- みんなの回答 （1）
- 専門家の回答
みんなの回答
- DoubtOwl
- ベストアンサー率50% (63/124)
細胞の性質が変わってしまったのかもしれません。 また、細胞によっては密度が低すぎたり高すぎりたりすると付着しないことがあります。 新しく細胞を手に入れるしかないかもしれません。
関連するQ&A
- 繊維芽細胞の接着性
薬大で研究している学生です。 今回、48wellプレートに正常ヒト肺線維芽細胞を3.0×10^4になるように播き、18時間後に、PBSで3回wellを洗浄したところ、細胞がほとんど剥がれてしまいました。 考えられる原因として、 (1)細胞がまだ張り付いていなかった。 →見た感じ張り付いていると思ったのですが、18時間では張り付かないのでしょうか？それとも、トリプシン処理のところで、トリプシンが効きすぎて、細胞接着が上手くいかなかったのでしょうか？(トリプシンはインキュベーター内に3分間静置） (2)繊維芽細胞は、コラーゲンなどの細胞外マトリックスでコートされたwellプレートでないと張り付きにくいのでしょうか？ それとも私の腕が悪いからでしょうか？？(>_<)行き詰ってしまったので、どなたか、繊維芽細胞を扱った経験がある方がいましたらよろしくお願い致します。
- ベストアンサー
- 生物学
- 24ウエルプレートでの培養細胞の観察
24ウェルプレートで付着性動物細胞を培養し、位相差顕微鏡で観察しております。 ところが、ウエルの中央部と縁では全く細胞の見え方が異なるので困っております。 縁に生えている細胞は形もシャープで、厚みもあり、大きく見えます。 これは、例えば、２４ウェルプレートの縁が接着されていて屈折が違うなど、光学的な問題なのでしょうか？ あるいは実際に中央部と縁では細胞の増殖・形態が変わってくるのでしょうか？ 同じようなご経験をお持ちの方、なにかご存知の方、ご解答お願いいたします。
- 締切済み
- 生物学
- 細胞接着性
ただいま骨芽細胞の培養の研究をしています。 文献を調べていて、どうしてもわからなかったので3点質問させていただきます。 まず１つめです。 基板への接着性の挙動を調べているのですが、ガラスへの細胞の接着ってどうなんですかね？ガラス基板へ表面処理を行い、その増殖の様子の違いを見ているのですが、そもそもガラス基板への接着、あるいは増殖性はよいものなのでしょうか？ ２つめです。 ある表面処理をした基板上で培養した骨芽細胞が非常に細長くなりました。また増殖の様子も細長い列になったような状態で増えていて、き基板全体には増殖が広がっていません。細胞になにか悪影響はあるのでしょうか？ ３つめです。 どういった表面が一般的に増殖しやすいのでしょうか？ まだ研究をはじめて4ヶ月でなかなか勉強が追いつかず、足りない部分が多々ありますが、どうかご協力お願い致します。
- 締切済み
- 生物学
- 接着性の細胞培養が上手く行きません
接着性の細胞培養が上手く行きません こんにちわ。初めて投稿します。私は大学の研究室で接着性の細胞（ＲＢＬ－２Ｈ３ ラットガン好塩基球細胞）の培養をおこなっているのですが、本来フラスコに接着するはずの細胞が剥がれて培養液中に浮遊する減少が相次いで困っています。 培地は10%FCSを含んだＤＭＥＭ培地（抗生物質：カナマイシン硫酸塩含む） 培養はＴ２５ｃｍ２フラスコで３７℃、５％ＣＯ２インキュベーターで行っています。 実験に使用しているチップは定期的にオートクレーブで滅菌していますし、培地を入れるメディウムびんも滅菌してちゃんとフィルターろ過も行っています。 細胞培養をはじめてから約３ヶ月で、以前は上手くいっていたのですがここ２週前から突然細胞の接着が起きないようになってしまいました。初めは細胞を起こした期間が長かったことが原因と考えて新しい細胞を起こしてみたのですが一向に改善されずに困っています。 一応培地は7.5%NaHCO3で赤～赤味を帯びたオレンジ色にまでｐＨをあわせてみたのですが、培地に何か問題があるのでしょうか？回答の程をお願いいたします。
- 締切済み
- 生物学
- 24穴プレートと96穴プレートで培養する時の細胞濃度
電気泳動の前に細胞を24穴プレートで培養したり、96穴プレートで培養したりしますが、それぞれどういったメリットやデメリットがあるのでしょうか。 単純に24穴の方がたくさん細胞を培養できるというメリットがあるだけなのでしょうか。 また、24穴プレートにまく細胞濃度にしても2×10の5乗/wellや3×10の5乗/wellなどがあり、実験の参考のための論文には書いていなかったので細胞濃度も比較実験しようとしています。 2×や3×以外の濃度で比較実験した方がよい細胞濃度はありますでしょうか。 よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- PBMCからの単球の分離の際、細胞が接着しません
「PBMCから単球の分離の際にフラスコに接着しない」について教えてください お世話になります。 PBMCから単球を分離する際、単核球1×10^7個程度得られました。 単核球を10％FBS含むRPMIに浮遊し、FBS処理したフラスコに注入し、37℃で1hr incubationしました。 接着細胞を回収しようと思い、顕微鏡でのぞいてみるとフラスコに接着している細胞が全くおらず、細胞は浮遊したままでした。 仕方がなく、浮遊液を回収して単核球として細胞を使用しました。 浮遊液回収後にも顕微鏡で確認してみましたが、細胞はおらず、やはり接着はしていなかったものと思われます。 どうして接着しないのでしょうか？ 教えていただけますか？
- 締切済み
- 生物学
- 接着細胞の継代法について
基本的な質問かも知れませんが、接着細胞の継代法はどのようなものですか？また、浮遊細胞の継代法とはどのように異なりますか？詳しく教えてもらえるとうれしいです。
- ベストアンサー
- 生物学
- 細胞播種（96well)のコツを教えてください。
閲覧ありがとうございます。 今年10月にバイオ系の研究室に配属されました大学３回生です。 以前細胞の継代について質問させて頂き、お陰様でようやくパスは安定して出来るようになりました。 現在、96wellプレートを用いたグロースのカウント（培養）が上手く出来ず大変困っています。 癌細胞（浮遊、接着）を細胞培養専用のフラスコを使って培養しています。 継代の際は、細胞液をチューブに移して遠心にかけ、上清を吸って培養液（RPMI)を入れ数個のフラスコに分けます。 その際、その細胞液をさらに培養液で希釈し2×10＾4cell/mLで100μLずつ96wellプレートに播種し、毎日グロースを算定板を用いてカウントします。 3回くらい播種しましたが、毎回細胞が思うように増えず、恥ずかしながら多くても本来のピークの1/10程度です・・・ フラスコに継代した細胞は順調に育ち、播種後のプレートを顕微鏡で覗いた時は大体均等に細胞が確認出来るのですが、その後培養液の色はほとんど変わらず・・ プレートは一日UVに当てる、マイクロピペットでのピペッティングを十分に行うなど自分なりに気をつけているのですが、何度も失敗しているので播種する時の操作が悪いと考えてます。 同級生も皆同じ方法で播種し、カウントしているのですが結果は結構ばらついていて、自分のようにピークが極端に少ない人もいるようです。また、一番上手くいっている人でもピークは昨年の先輩のデータの半分程でした。 初めは1×10＾4cell/mLで播種しましたが、育ちが悪いので2×10＾4cell/mLに変更しました。 しかし結果はほとんど変わらず、死細胞が極端に多くなります。 細胞播種の操作で、気をつけるべき事やここで失敗しやすいなど、アドバイスがあれば教えて頂きたいです。 また、プレート内の接着細胞をはがす際、どのくらいの間EDTAに浸ければ良いのかも知りたいです。何度もピペッティングすれば大丈夫なのでしょうか？ あまり長い間EDTAを入れていたら細胞が死んでしまう様なので… 質問が多くて申し訳ございませんが… 安定して良い結果を出せるように頑張りたいので、よろしければアドバイスをお願いします。
- 締切済み
- 生物学
- ９６ウェルプレートでの細胞実験
グライナーの９６ウェルプレートに細胞を撒き、一晩培養した後に細胞実験をしているのですが、どうもうまくいきません。 先輩がやるとうまくいくので細胞を撒く操作に問題があるように思うのですが、そんなことってありえると思いますか？ 細胞を維持する過程に問題があるということも考えましたが起こしてから一週間ぐらいなのでそんなに差が出ないと思っています。 細胞はRBL-2H3で、実験は抗原刺激による脱顆粒反応です。
- 締切済み
- アンケート
