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発現クローニング/cDNAクローニングについての問題がわからないので教えてください
生理活性の検出・測定は可能だが精製されていないタンパク質のcDNAのクローン化する方法を求めよ。 条件：そのタンパク質に対するmRNAはRNA溶液から単離できない。しかし、その組織のcDNAライブラリーの状態では各mRNAに対するcDNAはクローンとして単離できる。そして、あるcDNAクローンで対応するmRNAをRNA溶液から吊り上げることができる。 という問題なんですが 私は まず、RNA溶液のmRNAを全てプラスミドに組込み、培養し、できた各コロニーから大腸菌の活性を調べる(プラスミドに組込んだmRNAが発現するものと仮定する)。発現している目的のmRNAを組み込まれている大腸菌を取り出し、制限酵素により、mRNAを切り取る。mRNAを逆転写酵素を用いて逆転写してcDNAをクローニングする。 と考えたのですがこれができるのかわからないので、今回投稿させて頂きました。 これがあっているのか、または別の方法どちらでもかまいませんので、お分かりになる方は是非教えてください。
- linkslynx
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- samkuma
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1つ確認したいのですが，RNAとDNAの区別は出来ていますでしょうか？ ＞mRNAをプラスミドに組み込む これは果たして可能でしょうか？
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お礼
レスありがとうございます 組み込めるのはDNAだけでしたね この場合、まず逆転写したら大丈夫なのでしょうか。