RNA抽出について

質問

私は長年タンパク質専門で研究を行ってきたため、分子生物学は学生時以来なので大変困っております。
ラットの凍結組織(肝臓)からRNA抽出を行いましたが、うまくいきません。とは言え、同時に10本行ったらうち4~5本はOK、4本行ったら2本OK、と言った具合でいくつかは成功します。
キットはQIAGENのRNeasyPlusを使用し、凍結組織20~30mgに対し抽出液を600μl入れてポリトロンでホモジナイズし、gDNA eliminatorカラムも使用しています。中に入っているプロトコル通りであることも確認しました。組織の保存状態は悪くないです。うんと古いというわけでもありません。
研究室の人間に聞いても満足な返事が返って来ないので、こちらで質問させていただきました。経験がある方、アドバイス宜しくお願い致します。

回答No.8

rio2

主観かもしれませんがバイオアッセイの簡易キットでうまくいかない場合は、原点に返って古典的な方法を試みるとうまくいくことがしばしばあります。
特に各抽出試薬ではこのような印象を持っています。

total RNA抽出でしたら酸性フェノールとグアニジンチオシアネート、両性界面活性を含むキットではない単品試薬が国内では３つほど出ていますので、こちらで試験されることをお勧めします。

またRNAの分解を抑制する試薬も多数出ております。

ホモジナイズが不完全であることも疑われますが、肝臓ということですので比較的問題ではないかもしれません。

お礼

お礼が遅くなり、皆様方には大変失礼いたしました。
ようやく解決しました。
とっても悩んでいろいろ皆様のアドバイスに従って考えておりましたが、つまらないことが原因でした。

ここのところ、しばらく来ていなかった人が、ガラス容器にチューブを入れてRNA実験台に置きオートクレーブを忘れ、前に使ったアルミホイルがかぶっていたため、私はオートクレーブしたものと勘違いして使用していたことが判明いたしました。やっと復帰してきたため判明いたしました。

ただ、私は遺伝子実験には大変不慣れなため、皆様のアドバイスでいろいろと勉強になりました。皆様、本当にありがとうございました。