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遺伝子発現の際の大腸菌宿主の選び方
tac promotor の下流に発現させたいgene があるのですが、発現量が非常に少なくて困っています．control 発現タンパク質としてBAP (bacterial alkaliphosphatase)を使用していて、そちらの方は大量に発現が確認できています． promotorも同じです． sequeneも確認したところ、問題なさそうです． 現在、宿主の問題と考えてまして、宿主としてDH5a を使用していますが、BL21(DE3)二変更しようと考えていますが、適切でしょうか？ もし、何かいいアドバイスありましたら教えてください．
- meiseikageki
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インクルージョンボディにいってるっていう事ではないでしょうか？
補足
インクルージョンボディとは、大腸菌の部位の名前なのですか？それとも、タンパク質の構造が違うものなのでしょうか？ インクルージョンボディではWestern blottingでは検出されないのでしょうか？
- ga111
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BL21(DE3)は、T7のプロモーターをもつものに一般には使われるので、あまり適切ではないでしょう。ただ、lacI遺伝子があるので、コロニーが生えてくれば、試してみるのはいいかも。 T7のプロモーターにかえるか、GST、MBP融合蛋白でいくのがいいです。融合蛋白ですとGSTの高い翻訳効率が反映されやすいからです。
補足
丁寧な回答ありがとうございます． 参考URLも非常に参考になりました． DE3のない、ただのBL21を使用してtac promotor 下流のgeneからタンパク質発現を考えましたがどうでしょうか？
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補足
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