• 締切済み

ゲル濾過クロマトグラフィー

ゲル濾過による分子量検量線は球状タンパクでは直線的なのに糖タンパクや繊維状タンパクだと直線からはずれるのでしょうか？Webで調べましたが見つかりませんでした。どなたかよろしくお願いします。

  • 化学
  • 回答数1
  • ありがとう数3

みんなの回答

  • nopopon2
  • ベストアンサー率39% (13/33)
回答No.1

GPCの分離の基本は、固定相である充填剤（ゲル）の細孔（ポア）を利用し、大きな分子の順に溶出することです。測定物質が縦長、横長の状態など、方向によって、みかけの大きさが変化する場合、分子量をご認識してしまうことがあります。

  1. カテゴリ
  2. 学問・教育
  3. 自然科学
  4. 化学

関連するQ&A

  • ゲル濾過法

    ゲル濾過で蛋白質の分子量を決めたいんですけど、どうやったらいいですか？

  • ゲルろ過クロマトグラフィー

    卵白アルブミンとヘモグロビンの混合溶液をゲル ろ過し、得たサンプル７本と、アルブミンのみと ヘモグロビンのみのサンプルと分子量マーカーの 計１０本を流したのですが、カラムバッファーを入れる目的は、浸透圧をかけるためですよね？カラムバッファーの成分はなんですか？ あと、たんぱく質混合溶液をカラムベッドに加える前み全てのバッファーがカラム内にに入り込んだ状態にしたのはなぜですか？

  • 繊維状タンパク質について…

    ゲル濾過において繊維状タンパク質の溶出位置は分子量検量線からはずれるようなのですが、なぜなのですか？また、どのようにはずれるのでしょうか？ また、予習をやっていて出た疑問です。どなたか回答、よろしくお願いします。

  • ゲルろ過クロマトグラフィー

    ゲルろ過クロマトグラフィーを用いて蛋白質の分離をしたのですが、なぜ蛋白質溶液をカラムベッドに加える前にすべてバッファーがカラム内部に入った状態にしたのでしょうか？ 図書館で調べてみたのですがいまいちわかりません。 お願いします。

  • ゲルろ過について

    ゲルろ過についての質問です。これから行う実験で蛍光色素Cy5（アミノ基に共有結合するもの）をたんぱく質に標識させて電気泳動にかけたいのですが、前処理としてゲルろ過させてfreeのdyeを取り除きたいのです。一般にゲルろ過は １膨潤させた担体をカラムに充填する ２サンプル（蛍光標識させたものとfreeのdyeの混合物）を添加する。 ３分子量の大きい蛍光標識させたものが溶出されるまで溶出bufferを加え続ける。 という手順を経ると思うのですが、３の溶出bufferは加えずに、自然に溶出してくるのを待つというわけにはいかないのでしょうか。教えて下さい。

  • ゲルろ過と透析について

    先日ゲルろ過の実験を行ったのですが、「ゲルろ過の実験は、透析操作と同様な結果を得ることができる。」と先生が言ってました。なぜ、同様な結果を得ることができるのでしょうか？なんか違うと思ったんですが。ゲルろ過は分子量が大きいほうが先に出てくるのに対して透析は分子量の小さいものが膜を通りますよね？逆のはずですよね？先生の言っている意味がわかる方どうか教えてください。 　

  • ゲルろ過の塩濃度について

    現在理系学部生四年で卒研の真っ最中です。分子量約50000のタンパクと約30000のタンパクをゲルろ過クロマトグラフィーで分けようとしました。バッファーはpH７のリン酸バッファーに0.3Mの塩をくわえたものです。しかし、ベースラインが無く、ピークを回収しSDS-PAGEで確認しても、わかれていません。そこで、塩濃度を0M にして再度おこないましたが、やはりわかれません。わかれないのは、分子量の差があまり無いからだと思います。 一般的に塩濃度を高くすると、タンパクはまとまってカラムから出てくるイメージがあるのですが、ゲルろ過における塩濃度の設定はどのような意味があるのでしょうか？教えてください。

  • ゲル濾過カラムによる精製

    分子量1000～5000程度のものを回収してきたいのですが、ゲル濾過スピンカラムを2回繰り返して回収することはできるでしょうか。 まず排除限界1000程度のゲル濾過で分子量1000以上のものを回収し、次に排除限界5000くらいのゲル濾過で分子量5000以下のものを回収するという操作をしようと考えています。 ゲル濾過カラムを遠心する際は遠心速度と時間はどのように決定すればよいかでしょうか。また綺麗に排除限界分子量でわけるためには、どのような工夫が必要でしょうか。 アドバイス宜しくお願いします。

  • ゲルろ過とＳＤＳ

    ゲルろ過クロマトグラフィーを用いたたんぱく質の分離とＳＤＳ－ＰＡＧＥの実験を行ったのですが、 その実験で、ＳＤＳの染色像を見て疑問に思ったことがあったので、投稿させて頂きました。 ・卵白アルブミンとヘモグロビンの混合溶液をゲルろ過し、得たサンプル７本と、アルブミンのみとヘモグロビンのみのサンプルと分子量マーカーの計１０本を流したのですが、ゲルろ過したサンプルのうち４本はヘモグロビンのみのサンプルと同じ位置にでたのですが、残り３本にはまったく染色像が現れなかったのです。 これは、なぜなのでしょうか？ もちろんアルブミンのみのサンプルは染色像がしっかりとでていまし、マーカーより得られた分子量も文献値と近かったです。 混合溶液のアルブミン量が少なすぎたからなのでしょうか？ 他の染色像はしっかりしているので、そこだけ染色がうまくいってないと思うのは少しおかしいとも思うので、、、 何が原因なのでしょうか？ ・また、ヘモグロビンの染色像が現れた場所が文献値のヘモグロビンの分子量から考えられる場所と違ったのは、やはり、ＳＤＳより変性を受けヘモグロビンの立体構造が壊れたことによって４量体を形成してないからと考えてよいのでしょうか？ さらには、染色像が何個も？あるように見えるのですが、それは、４個のサブユニットが部分的に切れてしまって様々な分子量のヘモグロビンができたと考えてよいのでしょうか？ 長々と質問させてもらいまして、すみませんでした。 レポートの考察段階で困ってしまいました。教えていただけるとうれしいです。よろしくお願いします。

  • ゲルろ過カラムクロマトグラフィーのマーカーを教えてください！！

    卒研の操作に分からない部分ができてしまったのでこちらにて質問させていただきます。 いま、ペプチドの精製を行うためにゲルろ過オープンカラムクロマトグラフィーを行っているのですが、そのために流すマーカーのペプチドが分かりません。 ゲルろ過オープンカラムクロマトグラフィーに使用している担体は、アマシャムバイオサイエンス製のSephadex G-15 です。そのため、分画分子量範囲にあわせて、 １０の5乗ダルトン、１０の4乗ダルトン、１０の3乗ダルトンのペプチドをマーカーにしようと考えています。 どうぞよろしくお願いします。

注目のQ&A

カテゴリ

専門家に質問してみよう

職業から探して質問する

あなたにピッタリな商品が見つかる！ OKWAVEセレクト

質問する