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5'RACE～Tailing Reaction

Promega社のTerminal Deoxynucleotidyl Transferaseを用いて以下の様にTailing Reactionを行ったのですがうまくいきません。 TdT 1μl 付属の5×Buffer 4μl 精製したcDNA溶液 14μl 2mM ATP 1μl total 20μl 以上の溶液を混合 37℃，60min　70℃，10minでインキュベート 現在、promega社の方にTdTの活性について質問をしているところで その返答次第によってはTdT量を増やしたり、インキュベート時間を長くしたり しようと考えているのですが何か良い方法・アドバイスがあれば教えていただきたいです。 よろしくお願いします。

みんなの回答

  • kexe
  • ベストアンサー率30% (58/189)
回答No.1

Promega社さんのキット（でしょうか？）には ポジコンとなりうるcDNAなどは含まれていないのでしょうか？ あるのでしたら試してみるのも手かと思います 私が５’RACEをしたときはサンプルと使うキットに ほんと左右されました がんばってください

alice_with_tak
質問者

お礼

やはり５’ＲＡＣＥって難しいみたいんなんですね・・・ ありがとうございます、がんばってみます！

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