吸光度の算出方法と正しいモル吸光係数について
- 吸光度の算出方法について質問があります。p-nitrophenyl palmitate(pNPP)の濃度を加水分解させて得られるp-nitrophenolの吸光度を算出したいです。
- 自分の計算では、pNPP濃度やモル吸光係数を考慮して吸光度を算出しましたが、別の情報源では異なるモル吸光係数が示されています。
- どちらが正しいのか、正しい計算方法や参考にすべき情報源など、教えていただきたいです。
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吸光度を算出したいのですが。
ある濃度のp-nitrophenyl palmitate(pNPP)を加水分解させて、最終的に加水分解されたp-nitrophenolがどれくらいの吸光度を示すかを算出したいです（計測する際、実験の都合上15倍希釈をしています） 自分なりに計算しますと pNPP濃度=2.0×10^-4(mol/l) pNPPのモル吸光係数＝15.09×10^6(cm^2/mol) よりLambert-Beerの法則より 15.09×10^6×１×2×10^-7÷15(希釈したため)≒0.2 となりました。 ただ、加水分解されてできるのはp-nitrophenolなのだから、そのモル吸光係数を用いて計算するのが正しいと思うのです。 でも、p-nitrophenolのモル吸光係数は http://catalog.castle104.com/p/83939-new-england-biolabs-p-nitrophenyl-phosphate-pnpp- を参照する限り、1.8×１０＾４M-1 cm-1らしいです。 これで計算すると、単位の次元は合わないし、無理やり計算すると恐ろしく低い吸光度が算出されます。 どちらが正しいのでしょうか？ 後者の場合、自分は何を間違えているのでしょうか？ どなたかご教授お願いします。
- Hayasumi
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単位を整理しましょう．濃度単位Mは，mol/Lです．一方， >pNPPのモル吸光係数＝15.09×10^6(cm^2/mol) では，濃度単位としてmol/cm^3を使っています．さらに， >1.8×１０＾４M-1 cm-1らしいです。 の方は，濃度はM単位ですよね．Mとmol/cm^3で，1000倍の違いがあります．したがって，0.2 mMのpNPPが100％反応してp-nitrophenolが生成すると仮定して計算すれば， >低すぎる数値が算出されてしまいます。 とはならないと思います．ここまで理解してもらえたら，この件は落着すると思いますが．
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- tir70
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モル吸光係数の単位，M^-1 cm^-1の"cm^-1"は，セルの中の光が通る長さ「光路長」に関係した単位です．即ち，光が試料の中を単位cm通過する時の吸光度．通常，分光光度計による測定では，光路長1cmのキュベットを使うことが非常に多いので，光路長を意識する機会があまりないのは確かですが．
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補足
返信ありがとうございます。 すごい基本的な事を教えてください。 この大文字のMはmol/Lを示しているんですかね？ なら単位の次元があって、納得できます。 でも、そうなるとこの反応系においてp-nitrophenolの吸光係数を用いるのは間違いということになるんでしょうか？ 低すぎる数値が算出されてしまいます。