• 締切済み

吸光度について

β-D-ガラクトシダーゼがo-ニトロフェニルβ-D-ガラクトピラノシドを加水分解し、ガラクトースとo-ニトロフェノールを遊離させ、o-ニトロフェノールを定量することにより酵素活性を求める実験をやるのですが、調べてみると、吸光度をはかるときに280nmでやるときと420nmでやる2通りがあったのですが、どう違うのかが分かりません。 280nmはタンパク質に使われるのは知っているのですが、この実験で使うのか？と疑問です。

みんなの回答

  • elpkc
  • ベストアンサー率53% (626/1160)
回答No.1

o-ニトロフェノールの吸光スペクトルのピークが 2波長あるのか、o-ニトロフェノールの生成ではなく、 o-ニトロフェニルβ-D-ガラクトピラノシドの減少を測定する波長なのか。 ガラクトースは吸収はなさそうですし。 その辺りです。 各々の物質のピーク波長を調べてみてください。

aji321
質問者

お礼

ご回答ありがとうございました。

  1. カテゴリ
  2. 学問・教育
  3. 自然科学
  4. 生物学

関連するQ&A

  • βガラクトシダーゼ

    生化学の実習で、 p-ニトロフェニル－β,D-galactpyranoside(無色)　＋　H2O ⇒p-ニトロフェノール(アルカリ性にすると黄色)　＋　D-ガラクトース という反応があったのですが、βガラクトシダーゼはどのような働きをしているどういった酵素なのでしょうか？調べても見つからなくて…(>_<)

  • 酵素活性の違いについて

    ｐ－ニトロフェノール－ベータ－Ｄ－ガラクトース＋Ｈ２Ｏ 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　→ガラクトース＋ｐ－ニトロフェノール という反応で、ベータ－ガラクトシダーゼという酵素が使われるわけですが、 ｐ～ガラクトースの代わりにｏ－ニトロフェノール～ガラクトースを用いると、ｏ－～の方が反応速度が早いのはなぜなんでしょうか。 あと、クエン酸緩衝液よりもリン酸緩衝液を使った方が反応が早く進む理由も よく分かりません。構造式が書けないので分かりにくい点もあると思いますが、 よろしくお願いします。

  • 吸光度のついて

    Lowry法により、BSA溶液を用いて、タンパク質の定量の実験を行いました。そこで、吸光度を測る際、７５０nmの吸光度を水を対照として分光光度計で測定したのですが、「７５０nm」という値は、実験により、青色に呈することに関係するのでしょうか？吸光度についてよくわからないのでよろしくおねがいします。

  • 吸光度測定と酵素活性測定法

    化学の実験で乳酸デヒドロゲナーゼを280nm吸光度測定したらほとんど検出できなかったのですが、酵素活性では測定できました。 これは、つまり酵素活性測定法の方が感度が高いということなのでしょうか？また、特異性の高い測定法はどちらなのでしょうか。周囲と話し合ったのですが、 A.酵素活性測定法の方が特異性が高いという側の意見 →酵素は基質特異性があるから、特異性を示すのはこっち B.280nm吸光度測定法の方が特異性が高いという側の意見 →280nmは芳香環をもつ物質に特徴的な吸光度なので、特異性を示すのはこっち という意見がでて、分からなくなってしまいました。ご存知の方がいらっしゃったらアドバイスいただけないでしょうか？？宜しくお願いいたします。

  • 吸光度によるプロテアーゼ活性測定について

    プロテアーゼ活性についていまいち理解できないので教えて頂きたいです。 今回、ヘモグロビン溶液に、5μg/ml、10μg/ml、15μg/mlに希釈したペプシン溶液を加え、TCA溶液で反応を止めて、遠心分離してできた上澄み液の吸光度を測定する実験でした。 また、それぞれの濃度には1本のブランクを用意し、ヘモグロビン溶液にあらかじめTCA溶液を加えておき、そこに各濃度のペプシン溶液を加えて吸光度を測定しました。 教本に「反応液の吸光度からブランクの吸光度を差し引いた値がプロテアーゼによって遊離してきたアミノ酸量に相当する。 反応液中のTCA可溶性物質（遊離したアミノ酸）の280nmでの吸光度0.001の1分間あたりの変化が1単位に相当する。 1単位＝280nmでの0.001の吸光度変化/1分間」と書かれており、 プロテアーゼ活性を計算しなくてはならないのですが… そもそもプロテアーゼ活性とは何なんでしょうか…。調べはしましたが、文献に載っておらず、いまいち理解できませんでした。 それから、例えば、吸光度が 反応液：0.830 ブランク：0.339 の場合、単位は何単位になるのでしょうか？ 回答下さると助かります。宜しくお願いします。

  • 吸光度から・・・

    今回実験でラクトアルブミンの吸光度を測定しました。 測定条件は以下の通りです。 ・200mlの牛乳から中和上清164mlを得た。その中和上清のうち30mlを用いてラクトアルブミン(0.18g)を塩析させて取り出した。 ・実験により得られたラクトアルブミン(0.18g・湿重量)を蒸留水で2mlにメスアップ。 ・その2mlのなかから0.2mlとり、5mlに希釈した。（２５倍希釈） ・その5mlをA280で吸光度を測定した。 ・測定結果は　ピーク時の吸光度　280.8nm =　0.279 　でした。 ※実験書によると、280nm付近でピーク吸光度が１の時のタンパク質の濃度を1mg／mlであると仮定して、タンパク質の定量をせよ。　とあります。 このような条件で、中和上清30mlあたりのラクトアルブミンをどのように計算したらよいのかいまいち解りません。 ただ単に、吸光度より、タンパク質濃度0.279mg／mlだから・・・・×30？？？ でも何かおかしいですし・・・ それとも希釈したから、0.279mg×25　で、さらに吸光度に使用したのは溶液2mlの中の0.2mlだから　×10・・・　0.279mg×25×10で中和上清30mlあたりのラクトアルブミン量？？？ 考えていると余計に訳解らなくなってしまって・・・ どなたか教えてください。　ヨロシクお願いします。

  • 吸光係数の測定

    タンパク質の吸光係数の求め方を学習したのですが、いま一つ分かりませんでした。 分子吸光係数を求めるのに、吸光光度計を用いて吸光度を測定し濃度とあわせて算出する。 そのとき吸収波長を目的のタンパク質の最大吸収波長(p-ニトロフェノールなら405nm)に あわせてやるとのことだったのですがその理由がよく分かりませんでした。 最大吸収波長なら吸光度が安定するからとも考えたのですが、間違っていないでしょうか。 どなたか分かる方教えていただけないでしょうか。

  • 酵素実験！

    p-ニトロフェニルリン酸うぃ酸性ホスファターゼで、p-ニトロフェノールとリン酸に分解する反応を調べた。 p-ニトロフェノール(y)と時間(x)をプロットした。しかし！！！ このグラフは直線にならない！ 何でですか？？　　酵素が失活したから？？

  • 酵素活性の実験で植物の亜硝酸の濃度を吸光度で測った所マイナスの値になっ

    酵素活性の実験で植物の亜硝酸の濃度を吸光度で測った所マイナスの値になってしまいました。 理由がわかりません。お願いします。

  • 吸光光度法について

    吸光光度法について 吸光光度法について実験してそのレポートの考察がわかりません😭 実験内容はo-フェナントロリン(C12H8N2)はFe(II)と反応して［Fe(C12H8N12)-］2＋の安定な赤色錯体を生成する。このことを利用して水中のFe(II)を吸光光度法により定量する です。 実験結果より o-フェナントロリンーFe2＋錯体の吸光法は 1.0×10⁴となりました。

注目のQ&A

カテゴリ

専門家に質問してみよう

職業から探して質問する

あなたにピッタリな商品が見つかる！ OKWAVEセレクト

質問する