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抗体の切断
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1です。 ペプシンが樹脂等に固定されているタイプなら、振盪は必須。 そうでないときも、ゆるやかでよいので攪拌したほうがいい。 ですので、なんとか反応容器を工夫しましょう。 また、一般的に生化学反応では 4度のときは静置、37度など加温するときは振盪攪拌するもの、 という考え方で大方あってると思います。
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- Peptide
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１です。 目安ですが、 37度で3時間、SDS-PAGEで150Kのバンドがうすくなってるのを確認。 あまり進行してないなら、オーバーナイトを限度に。 いずれにせよProA/Gアフィニティー精製でそこそこは取れると思います。
お礼
ありがとうございます。 最後にもう一つだけお願いします。 反応させる時は恒温であれば水槽内でなくても出来るのでしょうか？ キットの手順書では試験管を37℃水槽につけて、 中がよく混ざるくらいに揺らして反応させるように書いてあったのですが うちにある浴槽ではMAXで振っても中身がうまく混ざらないんです・・・
- Peptide
- ベストアンサー率57% (8/14)
Fcに対してFabは酸に対して抵抗性がありますが、 さすがにペプシンの至適pH付近では少なからず変性が進みますので、 長くないほうがいいでしょう。 初めてならば、Pierce社のキット等、確立した手順に基づいて 教科書的に行うことが大切と思います。
お礼
お返事ありがとうございます。 キットでもやるつもりなんですがキットの手順書をみても 反応時間が分かりませんでした。 とりあえずキット反応時間をいろいろ試して行おうかと思います。
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お礼
ありがとうございました。 またわからないことがあったらよろしくご教授お願いします。