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アルカリ滅菌法
アルカリ滅菌法の最後にプラスミドＤＮＡの沈殿が得られたところで、ＴＥbufferを加える理由を教えてください。 また、ここでＴＥbufferではなく、誤ってＤ.Ｗ.を加えてしまったら何が起こるのでしょうか？？ どうすればこの失敗から回復できるのでしょうか。。 どなたかご存知でしたら教えてください！！ よろしくお願いいたします
- gekiotikun
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- kazu2960
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みなさんのいう通りですね。 アリカリ滅菌法ではなくて、アルカリ法の間違いじゃないですか？ アルカリ法でDNAを抽出しますから。 TEにはEDTAを混ぜているので、キレート剤のEDTAがマグネシウムイオンをトラップして、DNAseを不活性化させます。長期保存するならTEがよいですが、すぐに使用してしまうなら水でもかまいません。 プラスミド等はデリケートなので、強いショックやpHの変化で構造が壊れてしまいます。ソリューションの組成を勉強してみると実験も楽しくなりますよ。
お礼
アルカリ法なのですね・・・。 学校で配られたテキストだけを頼りにしてると恐ろしい目に・・・。 ありがとうございます。 水でも大丈夫と聞き安心しました！！ ありがとうございました！！
- miya_0726
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精製DNAの最大の敵であるDNaseは、その活性を発揮するためにマグネシウムイオンを必要とします。TEバッファーに含まれるEDTAはキレート剤の役割を果たし、マグネシウムイオンを含む金属イオンをトラップするため、TEバッファーに溶かしたDNAはDNaseの混入に強くなります。 TEバッファーの代わりに純水を使っても、DNAが少々溶解しにくくなる程度で、普通は問題ないです。ただ、経験上長期保存したときに分解されている率は高かったです。 現状純水に溶解しているDNAをなんとかしたいのでしたら、エタノール沈殿をやってバッファー交換するのがよいでしょう。お金があるならDNAをトラップするカラムキットを使えばより簡単です。
お礼
ＴＥbufferを使う理由が納得です。 ありがとうございます。 カラムキットを使うという方法もあるのですね！！ ありがとうございます！！！
- geneticist12
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ところで「アルカリ滅菌法」とい呼称はなにかの間違いでは？
お礼
実験テキストにアルカリ滅菌法となっていたのですが。 やはり検索しても出てこないのは呼称が違うのですね・・・。 ありがとうございました！！
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