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二次元電気泳動のサンプルでSDS-PAGE、Westernをやりたいのですが・・・
二次元電気泳動のサンプルでSDS-PAGE、Western Blottingをやりたいのですが、二次元電気泳動のサンプルには尿素がふくまれているため、煮沸をすると駄目になってしまいます。 何かいい方法はありませんか？
- pote-turbo
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煮沸しないでもSDS化できますよ。 サンプルバッファーを加えて常温で半日とか、37℃で１時間でいけます。
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- MIYD
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>二次元電気泳動のサンプルでSDS-PAGE、Western Blottingをやりたい 2Dのスポットを切り出して、 抽出したサンプルをもう一回電気泳動するのですか？ それとも二次元目のゲルからメンブレンにトランスファーしてWBするのですか？ それとも2D用に調整したサンプルを、SDS-PAGEで流したいのですか？ とりあえず、尿素をのぞきたいのでしたら、限外ろ過で除けます。
お礼
ご回答ありがとうございます。 2D用に調製したサンプルをSDS-PAGEでながしたいのです。 回答していただいた通り、限外ろ過を検討してみたいと思います。
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お礼
御回答ありがとうございます。 煮沸しなくてもSDS化出来るのですね！ とても勉強になりました。 教えていただいた方法で再度やってみようと思います。