免疫組織化学法のブロッキング

質問

プロトコールをみると、ウェスタンなどではスキムミルクやＢＳＡなどでブロッキングをしますが、免疫組織化学法では二次抗体を作製した動物の正常血清を用いているものが多いです。免疫組織化学ではなぜこのような血清を用いているのでしょうか。
あと、抗体のデータシートを見ていると、免疫動物と同種の動物に交差性を示しているものがあります。（例えば、免疫動物がマウスで反応性にヒトとマウスが書いてある）この場合、内在性のマウスＩｇＧに対する二次抗体の反応は無視できるのでしょうか。ただ反応性はあるが、ノンスペも無視できないということでしょうか。
よろしくお願いします。

回答No.3

happy-engawa

#2の回答者です。
　私も脳切片の染色をしています。還流固定しない新鮮凍結切片で、Elite ABCキットを使用しています。主にラットの脳切片ですが・・。
　ベクターＡＢＣのキットに入っているアンチマウスの二次抗体は、あまり良い印象を持っていません。ラットの脳切片でも、（還流固定していないこともあるかもしれませんが）二次抗体だけで、かなりノンスペに染まってしまいます。そのため、私は、二次抗体だけ、DAKO社の抗体（ラットのIgGで吸収をかけてあるアンチマウス二次抗体）を使用しています。ベクターＡＢＣキットのアンチマウス二次抗体は、ラットのＩｇＧにも交差するシロモノです。マウス切片では、もっと汚くなると思います。
　ＭＯＭに関しては、ブロッキング試薬のみの単品もベクター社から出ているので、二次抗体を変えても大丈夫だと思います。
　ちなみに、参考まで教えてもらいたいのですが、二次抗体だけでの染色パターンは、顕微鏡で見たときに、太目で短めの糸が絡み合ったようなパターンでしょうか？私がやったときには、そのようなパターンでした。あれは血管なんだろうか？いつも疑問に思っています。

お礼

私の場合、灌流固定をしているためかそのような染色パターンは見えてきません。どこが染まるなどはなく全体的に染まるため、核に局在しているような蛋白などは、比較することで確認できます。ただマウスＩｇＧのみで反応させた場合に、ＤＡＢでの褐色反応が他の二次抗体のみの場合と比べて格段に早く、抗体価が低いものや、細胞骨格に発現している蛋白の場合、陽性反応が区別できないことになってしまいます。ＭＯＭを使うと少しましになりましたが。
vector社のanti-mouseIgGはあまり良くないのですね。今抗体を買い換える余裕は当研究室にはないですが、次買うときはDAKO社のものを検討してみます。ありがとうございました。