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annealing bufferの作り方
oligoをligationする際、annealing bufferを使うよう、plasmidをくださる研究者から指示されました。 recipeは 200mM potassium accetate 60mM HEPES-KOH pH7.4 4mM Mg-acetate さて、どうやって作ればいいのでしょうか。
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1Mのpotassium accetateを40ml位つくる。 1MのHEPES-KOH pH7.4を500ml位つくる。 1MのMg-acetateを40ml位つくる。 8ml of 1M pottasium acatate 2.4ml of HEPES 1.6ml of Mg-acetate DDWで40mlにメスアップ 計算とストックソリューションが溶ける濃度かどうかは自分で確認してください。 ストックソリューションを作る量は自分が今後どのくらい使うかを考えて調節してください。
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- MIYD
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もう作り終わったと思いますが‥ 少し濃い目(大体8割くらい？)の状態(No1の場合だと400ml位)の水に必要なHEPESを溶かして、 その状態でpH調整をします。 その後で500mlにメスアップします。 pH調整用のKOHが薄かったり、あらかじめ溶かしておくvolumeが多いと、 最後にメスアップができなくなりますので注意してください。
お礼
ありがとうございました。 調整方法、よくわかりました。 ３日から実験を再開します。 早速、annealingをしたいと思います。
- MIYD
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Mg-acetate は160ulですね
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