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western blotでのタンパクの発現
boston4の回答
- boston4
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transfectionに問題が無く、mRNAも出ているのですね？ その上で、 HEK細胞を使っても、発現量が低いものは検出できないことはよくあります。抗体を使って、免沈して濃縮したサンプルをアプライしてみてはいかがでしょうか？ 膜タンパクですと、サンプル化するときの煮沸処理が致命的になることがあります。タンパク同士が凝集してきれいに可溶化されないのが原因です。そのような時は50度以上には温度をあげないのがコツです。私は室温で一晩放置なんてのもしたりします。
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