• ベストアンサー
  • すぐに回答を!

組み込む理由が判りません。

プラスミド・pHT114mutの段階でABCの能力を持ち、 大腸菌に組み込んで、取り出して pHT014に組み込んでpHT016になると ACの能力しか発現しないという流れだと思います。 大腸菌に入れて、出す間に何があるのですか? (論文の該当部分) A HindIII-BamHI fragment containing a region corresponding to the remaining single type III module was prepared from plasmid pHT014. The fragment was subcloned into BamHI- and HindIlldigested vector plasmid pUC119 to give plasmid pHT114mut. Oligonucleotide-directed mutagenesis was performed by the method of Kunkel with the Mutan-K mutagenesis kit. Plasmid pHT114mut was introduced into E. coli BW313, and uracil-containingsingle-stranded DNA was prepared. This DNA was used as a template and hybridized with a synthetic oligonucleotide, 5'-ACCGGAGGTACAGTGACGACAAATCCTGGT-3'. The left half of the oligonucleotide is complementary to the DNA region encoding the C-terminal end of the large N-terminal domain (catalytic domain), and the other half is complementary to the region encoding the N-terminal part of the Cterminal domain. Mutant clones were selected after sequencing by the dideoxy chain termination method of Sanger et al. The HindIII-BamHI segment in plasmid pHT014 was replaced by the HindIII-BamHI fragment prepared from pHT114mut with the desired deletion, giving plasmid pHT016.

共感・応援の気持ちを伝えよう!

  • 生物学
  • 回答数1
  • 閲覧数86
  • ありがとう数0

質問者が選んだベストアンサー

  • ベストアンサー
  • 回答No.1

>Plasmid pHT114mut was introduced into E. coli BW313, and uracil-containingsingle-stranded DNA was prepared. の部分ですね。ここにかかれているように、uracilを含む単鎖DNAを調製するためですね。 下記のURLに原理がかかれています。 時間に余裕があれば、 http://www.kochi-u.ac.jp/~tatataa/tech2003/gene/uracil.html にかかれている参考文献を読んでみると、更に理解が深まるでしょう。

参考URL:
http://bio.takara.co.jp/catalog/catalog_d.asp?C_ID=C0277

共感・感謝の気持ちを伝えよう!

関連するQ&A

  • segment と fragment

    The HindIII-BamHI segment in plasmid pHT014(AIII) was replaced by the HindIII-BamHI fragment prepared from pHT114mut with the desired deletion, giving plasmid pHT016 (A21II). segmentとfragmentの違いが判りません。 fragmentはプラスミドから切り出した 短いDNA部分だと思っていたのですが、 segmentも同じようなものなのですか?

  • 至急にお願いいたします

    プラスミドDNAの調整と制限地図の作製の実験をしました。 制限酵素であるHindIII、BamHIで切断されたプラスミドDNAと制限酵素未処理のプラスミドDNAのアガロースゲル電 気泳動を行いました。 しかし、制限酵素処理したプラスミドの制限地図を作る際に、白く光っているバンドを採用して、2点目(最初に出てきた白いバンドの後)に出てくるバンド(薄い灰色)は抜いて作製するように言われました。 これはなぜですか? 教えて下さい また、電気永動するにあたってどうして未処理のプラスミドと処理のプラスミドを利用したのかについても教えて下さい

  • 至急にお願いいたします

    至急にお願いいたします プラスミドDNAの調整と制限地図の作製の実験をしました。 制限酵素であるHindIII、BamHIで切断されたプラスミドDNAと制限酵素未処理のプラスミドDNAのアガロースゲル電 気泳動を行いました。 しかし、制限酵素処理したプラスミドの制限地図を作る際に、白く光っているバンドを採用して、2点目(最初に出てきた白いバンドの後)に出てくるバンド(薄い灰色)は抜いて作製するように言われました。丸く囲ってるところです これはなぜですか? 教えて下さい また、電気永動するにあたってどうして未処理のプラスミドと処理のプラスミドを利用したのかについても教えて下さい

  • Restriction Enzyme

    次の問題がテストで出たんですができませんでした。問題の状況がよくわからなかったのですが、誰か教えてください。 Let us assume that you have isolated a fragment obtained from a DNA molecule by treatment of that DNA with EcoR1 restriction enzyme. It's pure. You are inserting the fragment into a plasmid which contains only a single EcoR1 restriction cleavage site. Based on the size of the plasmid and the size of the fragment, you have shown that only one copy of the fragment is inserted per plasmid. When you begin sequencing the region of the plasmid on either side of the insert and the insert itself, you find that the regions on either side of the insert give you the expected sequence but the sequence of the insert gives you a mixture at each position. What has gone wrong? How would you explain theses results? よくわからなかったので、DNA MoleculeがEcoR1 restriction cleavage siteを2個もっていたためとか適当な事を書いておいたのですが、ダメでした。。。 問題文のMixtureと言うのが何をさしているのかがよくわかりませんでした。 どなたかわかる方教えてください。

  • 英語での遺伝学についての質問です。

    Know how to operate gel electrophresis to visualize bands of DNA fragments and interpret result. (Should know the right position to place the agarose gel on the gel tank, know the importance of loading dye and DNA ladder marker, know how to visualize bands of DNA fragments, and should know the correlation between the size of DNA fragment and the distance that fragment can migrate on the gel.) これはサザンブロット法のことをいっているのでしょうか? また、know the importance of loading dye and DNA ladder markerとshould know the correlation between the size of DNA fragment and the distance that fragment can migrate on the gelのところですが、それぞれ何を書けばいいのかわからないです。。。 英語で理解することが大事なのは分かっていますが、loading dye とかDNA ladderを英英で調べてもよく理解できず答えられなくて困っています・・・。 私が聞きたいのは、この二つの意味と、どのように答えればいいのかを教えていただきたいです。 答えじゃないですが、調べるキーワード(このように検索するなど)やどういうことを言っているのかをわかるかた教えてください。 長文になりましたが、よろしくお願いします。

  • 制限酵素

    Assume we are cloning a 1.5 kilobase fragment generated by cleavage of genomic DNA with BamH1 restriction enzyme into a plasmid which has a single site where it can be cleaved with the same restriction enzyme. The original plasmid is 5 kilobase in length. Following insertion of the plasmid and treastment with DNA ligase, you exmaine the size of your consruct electrophoretically. To you surprise, you find plasmids with sizes of 5, 7.5, 9, 10, 12, and 15 kilobase. Explain how these results might have been obtained? Can you think of any way in which the problem might have been prevented? この問題がテストで出たんですがよくわかりませんでした。 この問題は要するに、元々のプラスミドにBamH1で切られるサイトが何個あって、その場所はどこかってことを聞いてるんですか?

  • 複数のプラスミドとベクター 論文訳について

    めんどくさい質問ですみません。現在以下の論文を学校の課題で読んでいます。 マテリアル&メソッドの「遺伝子組換え」方法について記された部分なんですが・・・ 自分は遺伝子操作を行ったことがないので、理論は分かっているつもりだったんですが、意味がくみとれませんでしたorz 概要を説明すると、「AFR」というタンパクを大腸菌にて大量発現するために、遺伝子「afr gene」を含む組換え遺伝子をつくっているところです。 プラスミドとベクターがこんがらがってます。 質問は ・用いられてるベクター pCRII-TOPO 、pET24a(+) のちがいは? ・用いられてるプラスミドpPS18 、pA6Ch1、pA6Ch1HIS のちがいは? ・プラスミドに遺伝子を挿入したものをベクターとここではよんでいるのでしょうか? 全訳をかいていただく必要はないので、以上のことを読んでわかるひといたらお願いします。 The afr gene was amplified from genomic DNA (1 μg) of S. morlense S-30.7.5 by using the primers 5’-ATGAA(CT)CGCTGGGGACTGATCGGCGCGAGCACGAT-3’ and 5’-TCAAAGTCCCGTTTCGATCTCGAC-3’ derived from DNA sequences flanking the SMc04400 locus of the sequenced S. meliloti 1021 genome. The PCR product was separated in a 1% (wt/vol) agarose gel from which it was purified by using a MinElute gel extraction kit (QIAGEN) and then cloned into the vector pCRII-TOPO to yield plasmid pPS18 containing the 1-kb afr gene. Plasmid pPS18 was used as a template for subcloning afr into the expression vector pET24a(+) (Novagen, Darmstadt, Germany) via the NdeI and BamHI restriction sites of the primers 5’-TCTGCAGAATTCGCCCATATGAATCGCTGGGGACTGATC-3’ and 5’-AGTGTGCTGGAATTC GGATCCTCAAAGTCCCGTTTCGAT-3’ to yield plasmid pA6Ch1, which was transformed into E. coli BL21(DE3). To provide AFR with a C-terminal His6tag, plasmid pPS18 and the primers 5’-TCTGCAGAATTCGCCCATATGAATCGCTGGGGACTGATC-3’ and 5’-GGATCCTCA(GTG)6AAGTCCCGTTTCGATCTCGGC-3’ were used to introduce the afr fusion into pET24a(+), yielding plasmid pA6Ch1HIS for transformation into E. coli BL21(DE3). All inserts of the expression plasmids were verified by DNA sequence analysis.

  • 物理での英語がよく分からないので質問させてください。

    物理での英語がよく分からないので質問させてください。 Protein dissociation from and binding to DNA were carried out by applying a constant force and monitoring the DNA extension. Binding of single protein to DNA decreases the DNA end-to-end contour length by 3 nm. At equilibrium, the protein is bound to DNA. After the system was allowed to reach equilibrium, constant force was applied to DNA (two ends were pulled) and the DNA extension were measured. You can assume that the DNA is extended to its contour length and that for the sake of simplicity, under selected conditions you can ignore the DNA elasticity. 文章中の"DNA is extended to its contour length"というのがどういう意味なのかよく分かりません。これは「DNAが伸び得る最大まで伸びる」という解釈でいいのでしょうか?つまりDNAの両端を引っ張ると3nm伸びるという事で合ってるのでしょうか?

  • 英語の文章を和訳して下さい。

    After their defeat, the Ottoman Army gave Mustafa Kemal the organization of the defense of the region in August. The region was controlled by the 2nd Army. When Mustafa Kemal was assigned to his post, the enemy forces were in constant advance. Fighting around the east side of Lake Van continued throughout the summer but was inconclusive. In the earlier periods of the campaign, the XVI Corps managed to take Bitlis and Mush. Ahmet İzzet Paşa decided to attack one week after the conclusion of the Russian offensive. A military force was gathered and sent marching along the coast. The Second Army advanced on August 2. While Nikolai Nikolaevich Yudenich was in the north and pushing the Ottoman 3rd Army, the Ottoman 2nd Army was in the south facing the insurgency and the second branch of Russian army under General Tovmas Nazarbekian and the detachment Armenian volunteer units led by Andranik Ozanian. After fighting from 1–9 August 1916, the Ottoman Army was overwhelmed and the entire region fell to the Russian Empire and Armenian volunteers, and thus an assault on Van was prevented.

  • 日本語訳をお願いいたします。

    The German defenders were forced back from high ground to the west of Mulhouse on both banks of the Doller and into the Mulhouse suburbs, where a house-to-house battle took place. The streets and houses of Dornach were captured systematically and by the evening of 19 August the French had recaptured the city. After being overrun, the Germans withdrew hastily through the Hardt forest to avoid being cut off and crossed the Rhine pursued by the French, retreating to Ensisheim, 20 kilometres (12 mi) to the north. The French captured 24 guns, 3,000 prisoners and considerable amounts of equipment. With the capture of the Rhine bridges and valleys leading into the plain, the Army of Alsace had gained control of upper-Alsace. The French consolidated the captured ground and prepared to continue the offensive but on 23 August preparations were suspended, as news arrived of the defeats in Lorraine and Belgium; instead the French withdrew and consolidated the ridge line beyond the Fortified region of Belfort. On 26 August the French withdrew from Mulhouse to a more defensible line near Altkirch, to provide reinforcements for the French armies closer to Paris. The Army of Alsace was disbanded and the VII Corps was transferred to the Somme. The 8th Cavalry Division was attached to the First Army and two more divisions were sent later.