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DNAクローニングのメカニズムを教えてください！
hebikeraの回答
- hebikera
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バクテリアを大腸菌にクローニング、というのはバクテリアの遺伝子を、ということでよろしいのでしょうか？でしたら簡単な説明を。まず、バクテリアから取り出したDNAをPCRで増幅し、そのPCR産物を精製してベクターとなるプラスミド(あらかじめ制限酵素で切ってある)とリガーゼ(ライゲース)を用いて結合させます。一部のキットではこの際にライゲースではなく、特殊な加工をしたプラスミドを用いてイソメラーゼで結合させるようです。こうして組替えたプラスミドと、細胞壁をなくした大腸菌(コンピテントセル)を混合して氷中でしばらく接触させ、42度のお湯に2分間つけて(ヒートショック)、細胞内にとりこませます。この仕組みははっきりとは分かっていないのですが、ヒートショックにより細胞膜に隙間ができるとか、イマイチ説得力に欠ける説明があります(笑）。この形質転換体を培養することにより目的の遺伝子を持った大腸菌のコロニーを得ることができます。 組み込みの際のベクターの選定は、目的の遺伝子を再び取り出す際に使える制限酵素の種類や、形質転換効率、形質転換体かどうかをスクリーニングする際の手間(ブルーホワイトセレクションが行えるかどうか)などににかかわってきます。 おっと、そうそう、以上はベクターにプラスミドを用いた際の話です。 ベクターにλファージを用いる方法もありますが、かなり長くなりますし、組み込まれた大腸菌が死んでしまうのでご質問からは少しそれてしまうかもしれないため、一応割愛しました。 ご希望でしたらそちらも説明しますが？
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