- ベストアンサー
アガロースゲル電気泳動法
- みんなの回答 （2）
- 専門家の回答
質問者が選んだベストアンサー
様々な大きさのDNAが混在しているでしょうから、部分部分に濃いバンドが見えるものの、バンドが連続したラダー状になるんじゃないですかね？なので、目的はわかりませんが、そのままでは解析は難しいかと…。 No.1さんの言うとおり、通常はPCRなどで目的のバンドを増幅するなどの手段を先に取ると思います。
その他の回答 (1)
- SaySei
- ベストアンサー率32% (528/1642)
？ 条件はこれだけでしょうか。 アガロースゲルに単にDNAを流しても、何も起こりませんよ。たぶん。 特定のDNA領域をPCR法で増やして、増やした断片の長さ（重さ）の違いがあってはじめて、 アガロースゲルで電気泳動にかけたときにバンドの位置の違いとして見えます。 どの領域を増やすかによっても結果は変わるかと思われます。 （PCR法についてや、アロザイム解析についてお勉強すれば、 私の言いたいことは理解できるかと思います。） なので、上記ご質問内容では明瞭な回答は得られないかと思います。
関連するQ&A
- アガロースゲル電気泳動について
アガロースゲル電気泳動についてで、分子量が等しいもので、直鎖状DNA、環状DNA(超らせんを持つものと持たないものの二種類)の三種類で電気泳動を行ったところ、泳動速度の速さはどのような順番になるのでしょうか？ また、環状DNAの場合、超らせんをもつものともたないもの以外の分類みたいなものはあるのでしょうか？
- ベストアンサー
- 科学
- アガロースゲル電気泳動
現在、実験でアガロースゲルを用いて電気泳動を行なっています。 しかし、ポジティブコントロールは毎回バンドがでるのですが、目的とするバンドの方は、帯状にPCR産物が流れた跡のようなものが出るのみで、バンドが出なくなってしまいました。 1ヶ月くらい前まではきちんとバンドが出ていたので、プライマーの設計ミスでもなさそうなのですが、何が原因なのか分からず困っています。 PCRをかける前のDNAは10ng/μLで、実際電気泳動で流しているDNA濃度は測定していないため、分かりません。 ちなみに電気泳動の条件は以下のとおりです。 ・ゲル：1.5%アガロースゲル ・電圧：100V どなたか知恵を貸してください。 実際の電気泳動後の写真は、 http://oshietegoopcrdenkieidou.rakurakuhp.net/ に載せました。 よろしくお願いします。
- 締切済み
- 生物学
- アガロースゲル電気泳動について
アガロースゲル電気泳動について調べているのですがアガロースゲルの分子構造がイマイチわかりません。いろいろなサイトで調べてみたのですが、載っていなかったので、もし、いいサイト等あったら教えてください。
- ベストアンサー
- 化学
- アガロースゲル電気泳動で
ちわっす！ 答え魔ぽんたくんでっす♪ 今日は困ったコトがあって、投稿しました。 DNAマーカー（λ/HindIII）を1％アガロースゲルで電気泳動してるんだけど、DNAが高分子の部分でスメア状のバンドを作って上手く分離できません！！ (DNAがすべて、高分子エリアにスメア状バンドとして集まってしまいます) （T_T） 泳動バッファなどの試薬は調製済みのメーカー製プレミックス品を使っているので、試薬の組成は合ってます。 希釈率にもミスはありませんでした。 この場合、どのような原因が考えられますか？ ＜条件＞ ・泳動バッファ（TAEバッファ） ・ゲル（1×TAEバッファでアガロースを溶解した1％ゲル） ・電圧＆時間（50ｖ,90分） ・DNA量（100ng,10ng,3ng,1ng,300pg）
- ベストアンサー
- 生物学
- アガロースゲル電気泳動について
薬剤師国家試験95回問28に以下のような質問がありました。 「以下の問題の正誤を答えよ。 b. アガロースゲル電気泳動でDNAが分子サイズによって分離できるのは、DNAごとに単位電荷当りの質量が異なるからである。」 問題集の解答を見たところ、「DNAの構成単位であるヌクレオチドは塩基、糖（2-デオキシリボース）、リン酸から構成されており、電荷を持つのはリン酸部分である。このため、ヌクレオチド１個につき電荷１個となり、DNA全体としてはヌクレオチドの増加とともに電荷も増大するため、単位電荷当りの質量はDNA鎖の長さに関係なくほとんど変わらない。このため、DNAはアガロースゲルの持つ比較的大きな網目構造を利用する事で、分子サイズの違いにより分離することが出来る。」とありました。 ここで、疑問がわきました。解答に「DNA鎖の長さに関係なく」とありますが、DNA鎖の長さ（ヌクレオチドの長さ）が変われば、質量は変わりませんか？以上の点がよく分からない点です。ご存知の方がおられましたら、ぜひ教えていただけると幸いです。よろしくお願いいたします。 なお、自分で「DNAの構成単位であるヌクレオチドは塩基、糖（2-デオキシリボース）、リン酸から構成されており、電荷を持つのはリン酸部分である。そして、DNAの場合、電荷の大きさは分子の大きさに比例する。よって、DNAのサイズの小さいものは全体の電荷は小さく、DNAのサイズの大きいものは全体の電荷は大きい。しかし、同じ質量で比べたときの電荷の大きさ（単位質量当りの電荷）はどのDNAでも等しい。よって、単位電荷当りの質量はどのDNAでも等しい。よって、このため、DNAはアガロースゲルの持つ比較的大きな網目構造を利用する事で、分子サイズの違いにより分離することが出来る。」という考えは思いつきましたが、上記の解答のようないきなり、「単位電荷当りの質量はどのDNAでも等しい」と導くやり方がよく分かりません。よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- pcr,アガロースゲル電気泳動について
学校でＰＣＲからアガロースゲル電気泳動の実験をしたのですが、考察で分からないことがありこまっています。 どなたか答えていただけませんか？ １．電気泳動を行い正しくアニーリングできたかを確認するためにはどうすればいいですか？ ２．ＰＣＲでＤＮＡのすべての塩基配列がわかっていればＰＣＲプライマーが目的位置に正しくアニーリングする確率も、間違った位置にアニーリングする確率も正しい位置にアニーリングする確率が間違った位置にアニーリングの何倍になるのかがわかると思うのですが、具体的になにをすればその確率がだせるのか？ 以上の２点なのですができたら早めに回答をいただけると嬉しいです。 よろしくお願いします。
- ベストアンサー
- 生物学
- アガロースゲル電気泳動時にサンプルやマーカーが浮いてしまいます。。。
アガロースゲル電気泳動を行ってDNAやPCR産物のバンドを検出する際に、アプライしたサンプルやマーカーが泳動中にゲルから浮き出てしまい、解析できないことがしばしばあります。 dyeはBPBを使用していて、100Vで30分ぐらい泳動していますが、10分ぐらいでゲルに青色のバンドが全く残っていないという現状です。 バッファーは１×TBE,ゲルも１×TBEで１～２％アガロースゲルを通常毎回作成して使用しています。 サンプルの精製度が悪ければ浮いてくるという話は聞いたことがありますが、マーカーも浮いてきてしまうので原因が全くわかりません。 ほかの人は同じマーカーを使用していてもこのような現象はないということです。 ゲルの作成方法に問題があるのかと考えましたが、全くわかりません。 考えられる原因をいろいろと教えていただければ、大変助かります。 どうぞよろしくお願い致します。
- 締切済み
- 化学
