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ウニ卵の細胞固定、組織染色について

実験でウニ卵の組織染色をすることになりました。凍結して、組織断片をつくり、免疫染色を行ったのですが、きれいな切片ができません。固定後、20%スクロースにつけると、浸透圧の変化に影響されないという情報があるのですが、詳しいプロトコルを教えてください。

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  • xen1234
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同じような実験をしている論文のmaterial&methodを調べてみてはいかがでしょうか?役に立つと思います。 また、どのように優れたプロトコールであろうと、組織切片の切り方、 特に凍結切片の切り方は熟練を要するところがあります。 凍結した後のブロックの温度、クリオスタット内の温度、切片の厚さ、 同じ人がやってもうまくいったり、いかなかったりします。 もしかすると、プロトコールというより、質問者様の練習が必要なのかもしれません。 また、ウニ卵ではホールマウントで染色すると、切片を作る手間が省けるので良いかもしれません。実験の目的にもよりますが。

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質問者からのお礼

ご意見ありがとうございます。 返事が遅くなってしまいごめんなさい。 組織切片をつくるのは経験が必要なんですね。 分かりました。 色々、試行錯誤して頑張ろうとおもいます。 ホールマウントの染色は行いました。 こちらはきれいな結果を得ることができました。 とにかく、切片をいっぱい作って、練習します。 ありがとうございました。

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