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Ligation high
かなり前にまりますが（十年くらいかも） Ligation highというLigation kitを使用していたのですが その当時 発売されたもので、画期的だったのですが （室温で５分でライゲーションができるというのがうり） 今その商品のプロトコールを見てみると １６℃１時間となっています。 以前の製品は 室温 ５分というので あまりコロニーが得られずに ユーザーの 評判が悪く、プロトコールを改訂したのでしょうか？ 以前のプロトコールがあったことをご存知の方 いらっしゃいますか？（今の職場の人にそれを言っても 信じてもらえないんです）
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付着末端のligationでサブクローニング目的なら（ライブラリー作製のような目的ではなく、単一のインサートをクローニングする場合）、反応時間5分をうたっているキットは珍しくないです（PromegaのLigaFastやRocheのRapid DNA ligation kitなど）。というか普通のバッファー、T4 DNA ligaseでも5分も反応させればサブクローンくらいならとれます（ただし、recovery効率を著しく下げる他の要因、たとえばDNAのUV被曝などがなければ）。 だいたい、付着末端のligationは最初の5分か10分くらいで8割方進んでしまいます。あとは反応時間を延ばすにつれてじわじわあがっていきます。 ligation highは16℃30-60分がプロトコールになっていますが、lambda HindIII断片の重合実験例では5分でほとんど完了することも示されています。
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- grumpy_the_dwarf
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東洋紡のLGK-101でしたら、今でも「5分で出た！」って泳動写真が 貼ってありますよ(参考URLの真ん中あたり)。新発売のLGK-201で も、突出末端の場合の推奨反応条件に5～30分と書いてありますね。 記憶違いじゃなかったということで。
