- 締切済み
TLC展開について
いつもお世話になってます。 大学の卒論の実験で、TLC(薄層クロマトグラフィー)を用いた脂質混合物の分離を行ってますがなかなかうまくいかず、不安定なデータが出て困っています。 同じ操作を行って脂質を抽出したはずなのに、TLC展開後の目的バンドの濃さが、同一サンプル同士で異なってしまいます。 TLCで得たバンドの部分をHPLC解析にかけた時、目的産物の量が、同一サンプル間でぶれるので、平均がとれません。。。 TLCで安定しないのはTLC展開前にスポットした量が多すぎるから起こることでしょうか(しかいきちんと濃いバンドが出る場合もあります。)！？ TLCは、1×20cmシリカゲルプレートで行っています。 有機溶媒に飽和させた脂質40～50μlを下から2cmのところに何回かに分けてスポットしてドライヤー(ドライアー)で乾かした後、ベンゼンで展開させています。 濃い濃度の脂質をTLC展開させる際のコツなど、アドバイスいただければ大変うれしいです。
- 1fan9
- お礼率92% (133/144)
- 化学
- 回答数1
- ありがとう数1
- みんなの回答 （1）
- 専門家の回答
みんなの回答
＞TLCは、1×20cmシリカゲルプレートで行っています。 因みに、厚さは0.25mmの市販のものですか。 ＞TLCで安定しないのはTLC展開前にスポットした量が多すぎるから起こることでしょうか スポットする量が多すぎると分離能が一般に悪くなりますし、キャピラーレ（ヘマトリックス管）を使用してスポットするとばらつきが生じます。 私の経験では、 １：マイクロシリンジで一定量スポットする ２：点でスポットするのではなく帯状にスポットする ３：出来れば（これが結構便利です）、展開層つきのTLC板を使用する。 展開層つきTLC板：TLCの下部に約1cmほどシリカゲルの固定相ではなく濾紙状のものがついている。そこに化合物をスポットすると、展開溶媒により一斉にシリカゲル層まで上げられて同時に展開される便利なTLC板です。市販されています。 参考になればいいのですが。
関連するQ&A
- TLCの硫酸メタノール噴霧の反応
TLC(薄層クロマトグラフィー)のスポット検出に硫酸メタノール噴霧・加熱法を使ったのですが、これでスポットが見えたらどのような反応が起きているのですか？
- ベストアンサー
- 化学
- TLCについて
肝臓ホモジネートからコレステロール、トリアシルグリセロール、リン脂質をTLC（展開溶媒としてヘキサン：エーテル：酢酸＝8：2：0.1の混合溶液）をもちいて分離しました。 質問したいのは、TLC上ではリン脂質はほかの成分に比べスポット箇所から移動しない結果になったのですが、これはなぜでしょうか？ 自分が考えるのは、リン脂質は、そのほかの脂質に比べ親水性、疎水性の両親媒性をもつため、今回用いた展開溶媒（疎水度が高いものほど展開しやすい性質を持つ）では移動しにくいのではないかと考えるのですが、何か参考になるURLや、理由がありましたら教えていただきたいです。 よろしくお願いします。
- 締切済み
- 化学
- 薄層クロマトグラフィーの展開について
薄層クロマトグラフィーの展開について、あまりにも基本的なことだと思うのですが、答えが見つからないので、どうか教えてください！ 飽和させた展開槽にTLCプレートを入れた際、溶媒が上っていくのはどうしてでしょうか？ TLCで物質を分離するしくみは、理解できているのですが、溶媒の極性に関係なく、溶媒が上まで上がっていく理由が知りたいです。
- ベストアンサー
- 化学
- TLC分析の発色法について
薄層クロマトグラフィー（TLC)で展開溶媒はヘキサン：酢酸エチル＝３：２、試料はアニリン、サリチル酸、ナフタレンを使いました。この際の発色法はヨウ素以外になにかありますか？
- ベストアンサー
- 化学
- TLCのスポットの数について。
ある物質（純度99％）を水に溶かし、TLC法（シリカゲル薄層板）を行ったところ、スポットが2つ得られました。スポット位置を、(1)、(2)とします。 また、その物質のアミノ基を他の物質で置換した物質（純度99％）も同様に、スポットが２つ得られました。スポット位置を、(3)、(4)とします。 そして、その２つの物質を水に溶かしたものは、スポットが3つ得られました。(1)、(2)、(3)の位置です。 質問１：なぜ、ひとつの物質からふたつスポットが得られるのでしょうか？ 質問２：そして、なぜ２つの物質を混ぜた液からは、スポット(4)が得られなかったのでしょうか？(3)と(4)は、けっこう近くて、色も薄いですが、それよりも２つの物質が似ていることが関係しますか？ 展開溶媒は 酢酸ブチル、酢酸、水、2-プロです。 またRf値は(1)0.4、(2)0.3、(3)0.15、(4)0.1です。 ※以前質問したのですが、補足できなくなってしまって、こちらに質問しなおしました。以前解答してくださった方、申し訳ありません。当方、化学知識があまりありません。。。
- ベストアンサー
- 化学
- 薄層クロマトグラフィー(TLC)について
高校で薄層クロマトグラフィーによるアミノ酸の分離を行いました。 内容は、コンブと標準アミノ酸の溶液、このふたつを展開してコンブ中にグルタミン酸があることを確かめるものでした。 ここで質問があります。ひとつは、展開液にブタノール＋酢酸＋水を使ったのですが、ここにはどんな意味があるのでしょう？わからなかったのでいろいろ調べたところ、展開液には他にもフェノール＋水を使ったりするそうで。。。なぜブタノール＋酢酸＋水なのでしょう？できればなぜスポットが移動するのかその機構も交えて教えて欲しいです(^^;) もう一つ質問なのですが、この実験のあとに表品アミノ酸とクエン酸の融点測定をしました。これにはどんな意味があるのですか・・・？TLCのあとにやったので絶対関連してくると思うんです。 いろいろ一度に質問してしまいましたが、知ってる方がいたら是非教えてください。。。ホント困ってます(T-T)よろしくお願いしますっ。
- ベストアンサー
- 化学
- オキアミ抽出油、鮭筋肉抽出油の順相シリカゲル薄層クロマトグラフィーにつ
オキアミ抽出油、鮭筋肉抽出油の順相シリカゲル薄層クロマトグラフィーについてです。 それぞれ薄層にスポットするのですが 展開溶媒にベンゼン-酢酸エチルを用い展開溶媒は約５ミリリットル程度です このときアスタキサンチンジエステル、アスタキサンチンモノエステル、アスタキサンチン遊離型はどのような順番で展開されるのかわかるかたいらっしゃいますか？ 理由も教えていただけたら幸いです。
- 締切済み
- 化学
- 薄層クロマトグラフィーによるビタミンBの確認試験法
ドリンク剤に含まれるビタミンの確認試験をしようと思います。 方法はTLC（薄層クロマトグラフィー）です。 1本30ml中にビタミンB1（チアミン塩化物塩酸塩）10mg、B2（リボフラビン）2mg、B6（ピリドキシン塩酸塩）5mg含まれています。 展開溶媒、薄層板、スポット量、検出方法等、簡単で分かりやすい方法をお願いします。
- ベストアンサー
- 化学
お礼
ご回答ありがとうございます。 私は生物の実験でよく使うマイクロピペットでスポットしておりますが、やはりばらつきが生じるかもしれません。 >マイクロシリンジで一定量スポット これは良さそうですね！しかし、サンプル数が多いので洗浄時間を考えると今回の場合は少し厳しいです。 >帯状にスポット 今度やってみます！ >展開層つきTLC板 調べて見つからなかったので、分かりませんでしたが、見つけたときに参考にしてみます。当方は学部生なので、今、購入することは難しいです。 今回の実験ではスポットしたときに不純物が混ざっていることがあったので、脂質抽出後の操作に問題があったのかなとも思います。脂質層に水層の物質が混入していると展開がうまくいかないですよね！？
補足
>因みに、厚さは0.25mmの市販のものですか。 仰るとおりです。メルク社のシリカゲル60F254をダイヤモンドカッターで切って使用しております。