- 締切済み
対立遺伝子の片方のみPCR増幅できますか
- みんなの回答 （1）
- 専門家の回答
みんなの回答
対立遺伝子の塩基配列がわかっていて、いい位置にＰＣＲプライマーが設定できれば可能だと思います。父由来遺伝子と、母由来遺伝子がまったく同じ塩基配列なら、どちらかの選択的増幅はできません。できたとしても、同じ結果（塩基配列）になりますね。 父由来遺伝子と母由来遺伝子の塩基配列に差がある部分にＰＣＲプライマーを設計して、サーマルサイクラーにかければ良いかと思います。父由来遺伝子のみを増幅できるように設計したプライマーでのＰＣＲで増幅してきたバンドは、もちろん父由来です。念のために制限酵素カットやシーケンシングして確認するのもアリでしょう。
関連するQ&A
- 組換え遺伝子の抽出、PCRについて
組換え遺伝子について実験を始めたばかりのものです。組換え大豆の標品から組換え遺伝子と、大豆由来のレクチン遺伝子を検出しようと試みました。2ヶ月前には両方の遺伝子がPCRで増幅できましたが、再度同じ条件でPCRをしたところ、レクチンのみが増幅でき、組換え遺伝子は増幅できなくなってしまいました。この原因をずっと考えていますが、全くわかりません。どなたか良いアドバイスをお願いします。ちなみにプライマーなどには問題がありませんでした。
- ベストアンサー
- 生物学
- PCRでDNAが増幅されないのは・・
DNA断片をPCRで増幅し、電気泳動で検出する実験なのですが、「泳動バンドとして目に見えるほどまでは増えなかったサンプルでは、PCR反応中に何が起こっているか」という問いで、考えてもわかりません。どなたか教えてください。よろしくお願いします。
- 締切済み
- 生物学
- ＰＣＲの検出下限について
例えば、ウィルス性の疾病の場合、遺伝子検査で検出限界以下までウィルスが消えましたなど 聞いたりました。 この際用いられるのが、PCR法だと思うのですが、原理的に考えれば、 ウィルスのDNAが１分子ありさえすれば、検出できる感度まで、増幅できるのではないかと 思ってしまいます。 なぜ、ウィルス数が少ないと検出できないのでしょうか。 私なりに考える原因として、DNA合成酵素が、PCRの温度操作により次第に失活することが 上げられますが、新しいDNA合成酵素を添加し、Cycle数を増やせば検出できるレベルまで 増幅できる気もします。 直接の回答でなくても構いませんので、ご回答の程よろしくお願いいたします。
- 締切済み
- 生物学
- PCR, RFLP, 対立遺伝子の疑問
よろしくお願いいたします！ 二倍体生物（２ｎ）の場合、相同染色体に含まれる対立遺伝子が正常（AA)で、制限酵素によってDNAが切断されないとした場合、これをRFLP法での電気泳動の結果を基準とした場合です。 対立遺伝子の一方に塩基の変異があって（Aa）、変異した箇所が制限酵素に認識されるとき、RFLP法の結果、ほぼ同じ長さに切断されれば、2本のバンドが見られ（切断されないものと、切断されたもの）、切断された短い方のバンドは2倍のDNAを含むので、多少明るく見えるのではないでしょうか。 もし切断された長さに違いがあれば、3本のバンドに見えるのではないでしょうか。 次に、対立遺伝子の双方に塩基の変異がある場合（aa）、そこが制限酵素に認識されとすれば、DNAの真ん中あたりで切れれば、一本のバンド、長さに違いが生じれば、2本のバンドが見られる、と考えてもよいでしょうか？ それとも、どこか、根本的に間違っているでしょうか？ よろしくお願いします！
- ベストアンサー
- 生物学
- PCR法がよくわかりません。
PCR法のプライマーが結合する場面で増幅させたい所以外で、増幅させたい部分の末端（始まり）の塩基配列と同じ塩基配列があった場合、どうなるのでしょうか？ＤＮＡの塩基配列では被ってるところ（使いまわし？）が多数あるんですよね？ ＰＣＲ法を使わなくても何かの生物に増やしたい部分をいれて増やせばいいのでは、と思ったのですが… あと、親子鑑定やＤＮＡ鑑定でもＰＣＲ法が利用されてるみたいなので もしセンターや模試ででるならそれらのことも教えてくださいm(＿）m おんなじ言葉なんかいも使ってるし質問攻めで読みづらいですがおねがいします。
- ベストアンサー
- 生物学
- DNA断片をPCRで増幅し、増幅したものを電気泳動で確認するとバンドが
DNA断片をPCRで増幅し、増幅したものを電気泳動で確認するとバンドが確認できました。 そのPCR産物を使ってベクターにサブクローニングしたのですがまったくライゲーションできませんでした。 用いた方法はTAクローニングシステムです。 なぜサブクローニング出来なかったのか考えているのですが、PCR反応の際に用いたDNAポリメラーゼが3'にアデニンをうまく付加出来ないということはありえるのでしょうか？ 他に原因が思い浮かびません。 どなたかアドバイスいただけないでしょうか。 よろしくお願いいたします。
- ベストアンサー
- 生物学
- 大学の実験で特定ＤＮＡ配列を増幅するＰＣＲ法をやりましたが、ＰＣＲ法は
大学の実験で特定ＤＮＡ配列を増幅するＰＣＲ法をやりましたが、ＰＣＲ法は大変優れた方法であるが注意しなければならない点があるそうなのですが、その難点はどのようなところなのですか、 教えて下さい。
- ベストアンサー
- 生物学
- PCRについて質問があります。
ある特定の遺伝子をサイバーグリーンを用いたqRT-PCRで定量したのですが、うまくいきませんでした。その遺伝子は、通常のPCRでは、ちゃんとシングルのバンドが強く検出できます。しかし、同じサンプルをサイバーグリーンを用いたqRT-PCRでやるとうまくいきません。しかし、スタンダートカーブとして使うPCR産物は、増幅可能という理解不能な結果が出ます。 プライマー、テンプレート、マグネシウムの濃度勾配も試しましたが、うまくいきませんでした。しかも、ハウスキーピングの遺伝子は、同じサンプル中で綺麗に定量できます。こうなると、違いは、プライマーのみとなりますが、どうしてこうなるのか、もうお手上げ気味です。なにか提案のある方がいらしゃればお願いします。
- 締切済み
- 生物学
