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解決済み

トリプシン分解物の分取

  • 困ってます
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お礼率 79% (39/49)

タンパク質をトリプシン分解した後に、RP-HPLCでその分解物を分離し、それぞれ分取したいのですが、各ピークがかなり重なってしまいます。
何か良い分離条件はありませんか?
再クロマトなども考えたのですが、カラムが1つしかないためグラディエントを変えることぐらいしかできません。
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質問者が選んだベストアンサー

  • 回答No.1

専門ではなく、またどのようなタンパク質かわかりませんが、以下のサイトは参考になりますでしょうか?
1.http://www.shiseido.co.jp/s9904hlc/html/html500/hlcia006.htm
(カゼインのトリプシン分解物)
2.http://www.gak.co.jp/TIGG/TIGG44/44MR4j.html
(ヒアルロニダーゼ: 化学的、生物学的、臨床学的概説)
3.http://bio.takara.co.jp/catalog/application.asp?ID=210
(N-acetyl基のデブロッキング法)

ご参考まで。
お礼コメント
garrant

お礼率 79% (39/49)

早速の回答ありがとうございました。
まさにカゼインをトリプシン分解していたので非常に参考になりました。
投稿日時 - 2001-01-19 09:28:47
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その他の回答 (全1件)

  • 回答No.2

カラムを別のもので打つのが一番簡単だと思いますが、ないならば。現在の条件がわかりませんので何ともいえませんが、グラジェントの傾きをゆっくりにする。流速を変えてみるのが簡単な方法です。トリプシン分解でなくてもよいのならプロテースを変えるのも良いと思います。トリプシンの用に認識アミノ酸が2つでなく一つのものがお薦めです。リシルエンド、AspNなどどうでしょうか?

例ですがリン酸化サイトを決める実験。新規タンパクをとってきた実験(DNAでなくタンパク直接)などでは、行われているような方法がよくとられます。これらの方法を参考にされたらよいのではないでしょうか?メッドラインで検索してみましょう。

あとYahoo掲示板生物学 バイオテックニック質問箱を利用されては?
お礼コメント
garrant

お礼率 79% (39/49)

明確なご指摘ありがとうございました。
トリプシンの分解を目的にしておりますので他のプロテアーゼは現在のとこを考えておりません。
これからさらによく検討していきたいと思います。
投稿日時 - 2001-01-19 09:38:06


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