X-gal について。

質問

いつもお世話になっています。
タイトル通り、Ｘ－ｇａｌについてなのですが、
ブルーホワイトセレクションを行った所、生えてきた菌が全てホワイトでした。Ｘ－ｇａｌの活性が低下したか、もしくはDMFの方が問題なのでは？と思っているのですが、簡単にこれらを確認する事は可能でしょうか？
変な質問をしてしまって申し訳ありませんが、よろしくお願い致します。

回答No.2

geneticist12 · ベストアンサー

>簡単にこれらを確認する事は可能でしょうか？

素のままのベクターで形質転換したものをコントロールにすれば良いのでは。
すべてのコロニーが青くなるはずですね。

ライゲーションが非常にうまくいった場合、すべてのコロニーが白ということはありえます（ベクターの切れ残りがなく、かつセルフライゲーションが完全に排除されているなら）。

菌が高濃度のDMFが直接さらされると、cfuが下がるということはあるようですが、青くなるべきものが白いままということはないでしょう。

青くなるべきコロニーが青くならないのであれば、原因として考えられるのは、
・コンピーテントセルがF'因子を失っている（lacZが酵素活性を現すためには、宿主が酵素の一部をコードしたF'因子もっていなければなりません）。コンピーテントセルを自前で作る場合は、M9最少培地でF'を持っているものを選択して、速やかに培養、調製する必要があります。XL1-Blueなどはテトラサイクリン存在下で培養するとF'因子を持つものを選択できます。

・IPTGが不十分、または劣化している、またはそのほかの原因でlacZの発現が弱い。この場合、青くなるのに時間がかかるので、一晩培養しただけでは白いままに見えることがあります。

回答No.1

ebikichi

DMF?
溶媒に問題ありそうですか？
怪しげな溶媒を使うなんて言語道断ですよ！
怪しいと思ったら絶対使ってはいけないです

X-galを作り直しても同じ結果でしょうか？

IPTG塗ってますよね？

補足

DMFはN-N-dimetylformamideの略です。
ちゃんと記載しないですみません・・・。